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文檔簡介
1、目的:利用豚鼠到大鼠異種異位心臟移植模型,研究吡咯烷二硫氨基甲酸酯(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)在異種移植中抑制核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信號通路對樹突狀細(xì)胞(dendriteic cells,DC)表面共刺激分子CD80和CD86表達(dá)水平及急性血管性排斥反應(yīng)(acute vascular rejection,AVR)的影響,探討異種心臟移植免疫耐受機(jī)制。
2、方法:利用靜脈注射眼睛蛇毒因子(cobra venom factor,CVF)干預(yù)超急性排斥反應(yīng)(hyperacute rejection,HAR),行豚鼠到大鼠腹腔異位心臟移植。豚鼠和SD大鼠分別作為供受體,隨機(jī)分為六組,A組(空白組):不作任何處理;B組(PDTC組):予PDTC腹腔注射,根據(jù)取標(biāo)本時間不同又分四組,分別在PDTC處理后1小時、6小時、12小時和24小時取標(biāo)本;C組(移植組):行豚鼠到大鼠腹腔心臟移植;D組(PDTC
3、+移植組):PDTC預(yù)處理后行豚鼠到大鼠腹腔心臟移植;E組(CVF+移植組):CVF預(yù)處理后行豚鼠到大鼠腹腔心臟移植;F組(PDTC+CVF+移植組):PDTC、CVF預(yù)處理后行豚鼠到大鼠腹腔心臟移植。A組、B組受體行體外單向混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(mixed lymphocyte reaction,MLR)。測定各組受體p65的表達(dá)、培養(yǎng)粘附法分離各組大鼠脾臟樹突狀細(xì)胞并測定其表面分子OX-62、CD80和CD86的表達(dá)、記錄各組移植心臟的
4、存活時間和病理變化。 結(jié)果:(1)培養(yǎng)粘附法可以得到富集大鼠脾臟DC的細(xì)胞懸液,OX-62表達(dá)率為:15.04±0.68%,CD8611.02±1.33%,CD80無表達(dá)。 (2)正常大鼠(A組)NF-κBp65呈低表達(dá),陽性率為:6.36%。使用PDTC后不同時間點p65陽性率分別為:1h組6.10%,、6h組3.96%,12h組3.82%,24h組3.30%,移植后的C、D、E、F組p65陽性率分別為:7.73%、6
5、.13%、24.01%和10.26%。使用CVF預(yù)處理后進(jìn)行移植的E組、F組p65表達(dá)較A組顯著增高(P<0.05)。在使用CVF預(yù)處理的移植組中,使用PDTC預(yù)處理的E組p65表達(dá)較F組顯著增高(P<0.05)。 (3)MLR測得吸光度(opticaldensity,OD)值A(chǔ)組為2.89±0.03,B組為2.00±0.04;刺激效應(yīng):A組為621.80±7.618%,B組為399.80±1.196%,兩組比較有顯著性差異(P
6、<0.05)。 (4)大鼠脾臟DC表面CD80、CD86的表達(dá),A組:11.02±1.33%,CD80無表達(dá)。B組使用PDTC后CD86在1小時、6小時、12小時及24小時的表達(dá)分別為:10.7±1.23%、11.00±1.38%、10.94±1.46%和11.00±1.22%,CD80無表達(dá)。B組內(nèi)及其與A組間CD86表達(dá)均無顯著性差異(P>0.05)。移植后各組CD80無表達(dá),CD86的表達(dá):C組33.14±1.11%,D組
7、13.26±0.67%,E組54.10±2.07%,F(xiàn)19.06±0.93%,移植后各組(C、D、E、F組)CD86表達(dá)高于未移植組(A組、B組)(P<0.05);移植后E組CD86表達(dá)高于C組(P<0.05),使用PDCT處理的D組、F組CD86表達(dá)低于未使用PDTC組的E組、C組(P<0.05)。 (5)供心存活時間:C組:25.40±5.73分鐘,D組:24.20±4.82分鐘,兩組無顯著性差異(P>0.05),E組:32
8、0±27.39分鐘,較C組和D組延長(P<0.05),F(xiàn)組:518±54.95分鐘,較E組延長(P<0.05)。 (6)移植后供心病理:C組、D組均表現(xiàn)為超急性排斥反應(yīng),E組、F組呈延遲性異種排斥反應(yīng)。 結(jié)論:培養(yǎng)粘附法可得到大鼠脾臟DC富集液,通過DC表面分子(OX-62)測定,其收取率較高。NF-κB抑制劑PDTC可以使異種心臟移植受體大鼠脾臟DC的CD86分子的表達(dá)受到抑制。通過應(yīng)用CVF,排除超急性排斥反應(yīng)的情況
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