大腸桿菌罕見單糖UDP-L-RhaNAc3NFo合成途徑及糖基轉移酶功能的鑒定.pdf

1、大腸桿菌是一種重要的條件致病菌，能引起腹瀉甚至導致死亡。大腸桿菌的毒性往往和其O抗原悉悉相關。O抗原位于革蘭氏陰性細菌脂多糖分子的最外層，一般由多個寡糖重復單位組成。O抗原具有高度多樣性，并對細菌細胞膜功能的完整性非常重要。對O抗原合成途徑的研究有利于揭示細菌的致病機理，也可為抗生素和疫苗等的研究和生產提供依據，從而使大腸桿菌引起的傳染病得到更好的治愈。
　　 在大腸桿菌O抗原中已鑒定了十幾種單糖的合成基因，本研究將對大腸桿菌中

2、罕見單糖L-RhaNAc3NFo的合成途徑以及糖基轉移酶的功能進行鑒定。這不僅有助于加深我們對O抗原基因簇功能及其合成途徑的理解，也可為實現糖的體外合成奠定基礎。
　　 本研究根據已獲得的O抗原結構以及O抗原基因簇序列，利用生物信息學的手段，在實驗室前期工作基礎上完成了進一步的預測。預測發(fā)現大腸桿菌G1059中的罕見單糖L-RhaNAc3NFo共由4個基因編碼的蛋白合成，分別為orf4、orf5、orf6和orf7，并對蛋白的功

3、能進行了初步的預測。另外本研究還預測了大腸桿菌G3198和G2805中負責半乳糖轉移的糖基轉移酶orf11和wbwC基因的功能。
　　 本研究利用T7原核表達系統(tǒng)構建了相關基因的重組質粒，并在E.coli BL21(DE3)中對目的蛋白進行了表達，確立了目的蛋白的最適表達條件，同時對Orf4、Orf5、Orf6和Orf7蛋白進行了純化。隨后建立了體外的酶促反應，并采用毛細管電泳和質譜的方法對酶促反應的產物進行了鑒定。