受MeJA誘導的煙草糖基轉移酶基因的克隆及功能分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、中南民族大學碩士學位論文受MeJA誘導的煙草糖基轉移酶基因的克隆及功能分析姓名：袁磊申請學位級別：碩士專業(yè)：分析化學指導教師：劉學群20060520受MeJA誘導的煙草糖基轉移酶基因的遺傳轉化研究IIAbstractGlycosyltransferase(GTs)isatypeofenzymeswhichcatalyzethetransferofanucleotideactivatedsugar(mostlyUDPglucose)toa

2、diversearrayofnaturalproductswildlyexistintheplantanimalkingdoms.ThereactionsofsugarconjugationcatalyzedbyplantGTsmayincreasethestabilitywatersolubilityregulatetheactivityofhmonesdecreasetoxicityagainstthestress.Thereist

3、hetheeticalpracticalsignificancefstudyingthehmonesregulatedgeneexpressionofGTs.InthisstudyanovelclonedGTgenewhoseexpressionisduallyinducedbyMeJASAabinaryvectpCAMBIA1301wereusedarecombinedplaspRGTwithwholeGTsequenceapCAPG

4、USplascontainingafusedgeneofGTpromotercodingsequenceofGUSreptinggene(GT::GUS)wereconstructedrespectively.ThetwoplasswerethenintroducedintoE.coliDH5αAgrobacteriumtumefaciensLBA4404EHA105therecombinantswereed.TheneededpRGT

5、pCAPGUSplasDNAisolatedfromtherecombinantswerefurtheridentifiedthroughtheanalysesofspecificrestrictionenzymecleavagePCRamplificationwithspecificprimerssequencing.Itwassuggestedtheengineeringbacteriumcontainingtheobjective

6、genecouldbeusedfgeictransfmation.WiththehelpofTiplasofAgrobacteriumtumefacienstheGTgenetheGT::GUSweretransferredintoNicotianatobacumcv.Wisconsin38leafdiscsthetransgenictobaccoplantswerefinallyobtained.Itwasconfmedthatthe

7、objectivegeneswererecombinedintotobaccogenomebymethodofPCRamplificationwithspecificprimers.Statisticalanalysisshowedthattheaveragetransfmationefficiencywas8.4%whentheoptimalconditionfgeneratingroot12MSmediumwith0.2mgL1NA

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