大腸桿菌中某些糖基轉(zhuǎn)移酶的功能研究.pdf

1、大腸桿菌是存在于人體和其它高等動(dòng)物腸道內(nèi)的正常菌群。屬于條件致病菌，在宿主免疫力低下或者菌群感染寄主腸道以外其它地方時(shí)候能引起胃痛、嘔吐、腹瀉和菌血癥等病癥反應(yīng)。大腸桿菌細(xì)胞表面含有脂多糖成分，脂多糖由類(lèi)脂A、核心多糖和O特異多鏈組成，其中類(lèi)脂A是內(nèi)毒素成分，O特異多糖鏈即O抗原是大腸桿菌致病性的基礎(chǔ)。
　　 控制O抗原合成的基因在大腸桿菌染色體上多成簇存在，相關(guān)的基因可以分為：?jiǎn)翁呛铣擅富?、糖基轉(zhuǎn)移酶基因和寡糖單位處理酶基因

2、。分別負(fù)責(zé)O抗原寡糖鏈中的單糖單位合成、轉(zhuǎn)移和聚合。大腸桿菌主要通過(guò)Wzx/Wzy途徑、ABC轉(zhuǎn)運(yùn)途徑和合酶途徑合成O抗原。O抗原可以作為大腸桿菌的分類(lèi)標(biāo)識(shí)，目前根據(jù)不同的O抗原可以把大腸桿菌分為180多個(gè)血清型。而大腸桿菌O抗原基因簇中種類(lèi)繁多的糖基轉(zhuǎn)移酶、單糖合成酶和寡糖單位處理酶基因?yàn)槿祟?lèi)需要的寡糖分子的生物合成提供了豐富的基因資源。
　　 本論文結(jié)合實(shí)驗(yàn)室的前期工作和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，選擇大腸桿菌O107和O117的wclY基因

3、，大腸桿菌O6orf3，O23 orf6，O78 orf1，O88 orf11和O126 wbgK基因作為研究的對(duì)象。大腸桿菌O107的O117的O抗原多糖鏈早已被破譯，兩株菌株的多糖鏈只有一個(gè)糖單位不同，在比對(duì)分析兩株菌株的O抗原基因簇發(fā)現(xiàn)只有wclY基因有部分序列不同，所以我們預(yù)測(cè)大腸桿菌O107和O117的wclY基因各自負(fù)責(zé)這兩株菌株中那個(gè)不相同的糖單位的連接。本研究中，我們利用同源重組缺失的原理構(gòu)建O107和O117的wclY

4、基因的缺失型菌株，用氯霉素基因代替正常的wclY基因獲得缺失型菌株。然后再將O107和O117的野生型welY基因分別回補(bǔ)至O107和O117的wclY基因缺陷型菌株中，通過(guò)核磁分析回補(bǔ)菌株的多糖鏈結(jié)構(gòu)，從而驗(yàn)證了這兩個(gè)基因的功能。本課題中我們還構(gòu)建了O6orf3，O23 orf6，O78 orf1，O88 orf11和O126 wbgK基因的原核表達(dá)克隆，研究確定了O6 ORF3，O23 ORF6，O78 ORF和O88 ORF11蛋