馬爾尼菲青霉及糖皮質(zhì)激素對巨噬細(xì)胞TLR-2、TLR-4、Dectin-1表達(dá)的影響.pdf

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文馬爾尼菲青霉及糖皮質(zhì)激素對巨噬細(xì)胞TLR-2、TLR-4、Dectin-1表達(dá)的影響姓名：趙文杰申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：皮膚病與性病學(xué)指導(dǎo)教師：席麗艷20080523中山大學(xué)博士學(xué)位論文 中文摘要研究目的通過馬爾尼菲青霉刺激小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，觀察巨噬細(xì)胞與真菌識別的相關(guān)模式識別受體T L R ．2 、T L R ．4 、D e c t i n ．1 的表達(dá)變化，并以D E X 作用于巨噬細(xì)胞后進(jìn)一步研究其在巨噬細(xì)胞識

2、別、吞噬真菌過程中可能的抑制作用。驗證并評價馬爾尼菲青霉對巨噬細(xì)胞固有免疫相關(guān)受體的作用及D E X 的抑制機制。為馬爾尼菲青霉發(fā)病機制的研究及今后可能的靶向治療奠定基礎(chǔ)。材料與方法1 ．實驗分組：1 ) 馬爾尼菲青霉對模式識別受體T L R ．2 、T L R ．4 、D e c t i n ．1 作用的研究分組：c o n t r o l 組；L P S 組； L 鋤i n a r i n 組； P M 組2 ) D E X 對模式

3、識別受體抑制作用的研究分組：c o n t r 0 1 組； D E X 組；P M 組；P M + D E X 組2 ．實驗菌株：分離自我科病人的馬爾尼菲青霉臨床株S U M S0 1 5 2 。雙相性誘導(dǎo)與菌株的培養(yǎng)：以溫度作為處理因素，體外進(jìn)行雙相性誘導(dǎo)，3 7 ℃誘導(dǎo)酵母相的轉(zhuǎn)變。收集酵母相菌株，以6 5 ℃水浴滅活1 h 。3 ．實驗動物及細(xì)胞：雄性B A L B ／C 小鼠，以液體硫乙醇酸鹽刺激后通過灌洗收集腹腔巨噬細(xì)胞。4

4、 ．方法：1 ) 巨噬細(xì)胞與P M 反應(yīng)后的激活采用E L I S A 法分別檢測共培養(yǎng)上清液中n 盯．a(chǎn) ，I L ．1 2 釋放水平的改變；R e a lT i m e P C R 法檢測巨噬細(xì)胞T N F ．a(chǎn) ，I L ．1 2 基因水平的改變。2 ) 共培養(yǎng)后T L R ．2 、T L R - 4 、D e c t i n ．1 表達(dá)的改變采用流式細(xì)胞術(shù)及R e a lT i m eP C R 法檢測共培養(yǎng)后小鼠腹腔巨噬細(xì)胞T