以重組TrxTSHRc、TrxTSHRn蛋白為抗原ELISA檢測(cè)人血清TRAb含量.pdf

1、自身免疫性甲狀腺疾病(autoimmunethyroiddisease，AITD)是一組發(fā)病機(jī)制復(fù)雜的器官特異性自身免疫疾病。人促甲狀腺激素受體(hTSHR)是AITD的主要靶抗原，在AITD的發(fā)病中起重要作用。hTSHR基因定位于14號(hào)染色體(14q31)上，是一種G蛋白偶聯(lián)受體，為大分子糖蛋白其肽鏈可分為膜外區(qū)，跨膜區(qū)和膜內(nèi)區(qū)。TSHR膜外區(qū)(TSHR-ecd)為促甲狀腺激素(TSH)或TSHR抗體(TRAb)識(shí)別及結(jié)合部位，有廣泛

2、的、多個(gè)不連續(xù)的結(jié)合位點(diǎn)。其中TSHR刺激型抗體(TSAb)的抗原決定簇存在于膜外區(qū)的N端(氨基酸3437，40，4245，5256)，TSHR刺激阻斷型抗體(TSBAb)的抗原決定簇存在于膜外區(qū)的C端(氨基酸301，385，390)，而這些區(qū)域也都是TSH的結(jié)合位點(diǎn)。TSH主要作用的靶器官是甲狀腺，它是通過(guò)與甲狀腺細(xì)胞膜上的TSH受體TSHR結(jié)合，通過(guò)CAMP第二信號(hào)系統(tǒng)引起一系列生物學(xué)反應(yīng)，促進(jìn)甲狀腺激素的分泌，提高甲狀腺的攝碘能力

3、并促進(jìn)甲狀腺激素的合成、釋放，對(duì)甲狀腺組織的生長(zhǎng)、分化等起著非常重要的作用。TSHR屬甲狀腺的正常組分，但是，遺傳因素的存在和免疫因素、環(huán)境因素的誘發(fā)，引起了hTSHR的變異，使其產(chǎn)生了抗原性，致TSHR特異性免疫原肽得以暴露，破壞了人體對(duì)TSHR的耐受性，產(chǎn)生大量的TRAb，引發(fā)免疫應(yīng)答而致病。TRAb的檢測(cè)在AITD的科研及臨床中有著極其重要的意義。 目的:以本室制備富含TSAb抗原決定簇的重組TrxTSHRn蛋白、富含TS

4、BAb抗原決定簇的重組TrxTSHRc蛋白分別作為抗原，酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)檢測(cè)人血清TRAb(包括TSAb、TSBAb)含量，探討此TRAb檢測(cè)在AITD診斷和治療中的意義。 方法:取本室研制的重組TrxTSHRn、TrxTSHRc蛋白為抗原，通過(guò)不同的抗原包被量、不同的血清稀釋度優(yōu)化，建立TSAb、TSBAb的間接ELISA檢測(cè)方法。經(jīng)精密度測(cè)試后，用于檢測(cè)不同年齡、性別組健康人群，及各甲狀腺疾病患者血清中的TRAb。

5、 結(jié)果:1.以TrxTSHRc蛋白為抗原TRAb檢測(cè)，抗原包被量16ng/100μl、待測(cè)血清稀釋100倍時(shí)陽(yáng)性和陰性血清OD405分別為1.325和0.358，批內(nèi)變異cv％為3.77％和3.42％，批間變異cv％為4.87％和5.12％，正常人中OD405值為0.319±0.107，正常值范圍為0.105～0.533，正常人組陽(yáng)性率3.30％(9/272)；Hashimoto甲狀腺炎患者陽(yáng)性率66.01％(336/509)，

6、其中伴甲狀腺功能減退者陽(yáng)性率77.78％(252/324)、伴甲狀腺功能亢進(jìn)者52.94％(63/119)、甲功正常者31.82％(21/66)；初發(fā)Graves’患者陽(yáng)性率41.86％(44/105)；治療1年Graves’患者陽(yáng)性率17.86％(5/28)；單純性甲狀腺腫患者陽(yáng)性率6.98％(3/43)；亞急性甲狀腺炎患者陽(yáng)性率11.1％(5/45)；非毒性結(jié)節(jié)性甲狀腺腫患者陽(yáng)性率8.70％(6/69)；甲狀腺腺瘤患者陽(yáng)性率3.2％

7、(1/31)。 2.以TrxTSHRn蛋白為抗原TRAb檢測(cè)，抗原包被量100ng/100μl、待測(cè)血清稀釋100倍時(shí)陽(yáng)性和陰性血清OD405分別為1.098和0.410，批內(nèi)變異為3.53％和4.12％，批間變異為4.52％和4.67％，正常人群中兒童組共115例(0至14歲，平均3.8歲)OD405為0.186±0.094，正常成人組1060例(18至81歲)OD405值為0.398±0.167，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，性別組

8、之間及成人組各年齡段之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。成人組正常值范圍0.064～0.732，陽(yáng)性率2.45％(26/1060)、初發(fā)Graves’患者陽(yáng)性率70.31％(74/105)、治療1年Graves’患者陽(yáng)性率35.7％(10/28)、Hashimoto甲狀腺炎患者陽(yáng)性率36.67％(44/120)、單純性甲狀腺腫患者陽(yáng)性率4.6％(2/43)、亞急性甲狀腺炎患者陽(yáng)性率6.67％(3/45)、非毒性結(jié)節(jié)性甲狀腺腫患者陽(yáng)性率7.25％(5/