CALM1基因、ER1基因SNP多態(tài)性與青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸的關(guān)聯(lián)性研究.pdf

1、研究目的： 1、明確鈣調(diào)蛋白1基因(Camodulin 1，CALM1基因)、雌激素受體1(Estrogenreceptorl，ER1基因)在AIS發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮的效應(yīng)，依據(jù)研究結(jié)果提出可能的AIS病因?qū)W假說。 2、明確AIS候選基因(CALM1基因、ER1基因)多態(tài)性與AIS不同的臨床表型是否存在因果關(guān)系。 研究方法： 1、研究對(duì)象。 取青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸患者100例，男性19例，女性81例，

2、平均年齡15.11歲(10～20歲)；對(duì)照組100例，男性25例，女性75例，平均年齡15.55歲(10～19歲)。所有入選側(cè)凸患者診斷明確，資料齊全，全部來源于北京協(xié)和醫(yī)院脊柱外科2005年10月至2007年4月接受手術(shù)治療的側(cè)凸患者。 2、實(shí)驗(yàn)方法 1）QIAamp DNA Blood Mini Kit試劑盒提取DNA： 20根據(jù)預(yù)先選定CALM1基因啟動(dòng)子區(qū)rs12885713、3’-UTR區(qū)rs5871位

3、點(diǎn)和ER1基因第一內(nèi)含子rs2234693、rs9340799位點(diǎn)設(shè)計(jì)引物，完成PCR擴(kuò)增反應(yīng)； 3）AB13700測(cè)序儀對(duì)所得PCR擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序，并用GeneTool軟件，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)序列，找出SNP位點(diǎn)，統(tǒng)計(jì)每個(gè)個(gè)體在該位點(diǎn)的基因型。 4）SAS8.2軟件統(tǒng)計(jì)分析病例組、對(duì)照組SNP位點(diǎn)等位基因、基因型多態(tài)性有無差異； 5）分別按照側(cè)凸頂點(diǎn)所在位置(主彎)、PUMC分型以及Cobb角≥40度或50度對(duì)病例組進(jìn)行分

4、組，完成病例組和對(duì)照組以及病例組之間比較，研究遺傳病因?qū)W機(jī)制和特發(fā)性脊柱側(cè)凸不同臨床表形之間有無關(guān)聯(lián)意義。 研究結(jié)果： 1、AIS流行病學(xué)資料分析。 (1)AIS患者組術(shù)后矯正身高顯著高于對(duì)照組(t=3.700，P=0.003)。 (2)AIS組患者初潮年齡明顯早于對(duì)照組(Z=-3.956，P<0.0001)。 2、SNP位點(diǎn)等位基因多態(tài)性-AIS。 (1)PUMC分型Ⅱ型AIS患者CAL

5、M1基因rs12885713位點(diǎn)、ERl基因rs2234693位點(diǎn)等位基因多態(tài)性和對(duì)照組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P值分別為0.034、0.014)。 (2)胸彎(主彎)AIS患者CALM1基因rs5871位點(diǎn)等位基因多態(tài)性和對(duì)照組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.035)。 (3)腰彎(主彎)AIS患者CALM1基因rs12885713、ERl基因rs9340799位點(diǎn)等位基因多態(tài)性和對(duì)照組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性(P值分別為0.009、0

6、.014)。 3、基因型多態(tài)性-AIS。 (1)Cobb角≥40度組AIS患者ER1基因rs2234693位點(diǎn)基因型多念性與對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.0001)。 (2)其余所有本組研究位點(diǎn)基因型多態(tài)性與對(duì)照組沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 4、基因型組合-AIS。 (1)CAKLM1基因rs12885713位點(diǎn)+ER1基因rs2234693位點(diǎn)聯(lián)合分析，AIS組和對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.

7、049)。 (2)四個(gè)SNP位點(diǎn)基因型其余組合，AIS組和對(duì)照組未及明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 結(jié)論： 1、PLIMC分型Ⅱ型AIS的發(fā)生發(fā)展可能和CALM1基因rs12885713(-16C>T)位點(diǎn)、ER1基因PvuⅡ(rs2234693)位點(diǎn)的多態(tài)性有一定關(guān)聯(lián)。 2、胸彎AIS的發(fā)生發(fā)展可能和CALM1基因rs5871位點(diǎn)多態(tài)性有一定關(guān)聯(lián)。 3、腰彎AIS的發(fā)生發(fā)展可能和CALM1基因

8、rs12885713(-16C>T)位點(diǎn)、ER1基因XbaⅠ位點(diǎn)(rs9340799)位點(diǎn)多態(tài)性有一定關(guān)聯(lián)。 4、由于按主彎側(cè)凸頂點(diǎn)分型的不精確性，以及按照PUMC分型的初步陽性結(jié)果，初步顯示PUMC分型不僅是指導(dǎo)臨床治療的可靠標(biāo)準(zhǔn)，而且可能是符合遺傳病因?qū)W機(jī)制的合理分型。 5、AIS不同的臨床表型特征(PUMC)分型可能和不同的SNP位點(diǎn)多態(tài)性有關(guān)。 6、不同基因多態(tài)性組合可能和AIS的發(fā)生發(fā)展有一定關(guān)聯(lián)性。