以HBC和HPV16L1為載體的流感通用疫苗研究.pdf

1、背景知識：
　　流感（Influenza）是由流行性感冒病毒（Influenzavirus）感染引起的急性呼吸道傳染病。流感病毒屬于正粘病毒科，可感染人和多種動物。流感病毒抗原性易發(fā)生變異，抗原的漂移和轉換給流感的防治帶來了較大困難。接種疫苗仍然是預防和控制流感的主要手段。目前使用的疫苗包括全病毒疫苗、裂解疫苗和減毒活疫苗，但都需要每年更換疫苗株接種。因此，發(fā)展流感通用疫苗，實現(xiàn)幾年接種免疫一次是流感疫苗研究發(fā)展的方向。
　

2、　目的：
　　本實驗構建以乙肝核心蛋白（HBC）和人乳頭瘤病毒主要衣殼蛋白（HPV16L1）為載體的甲型流感病毒M2基因胞外區(qū)（M2e）通用疫苗桿粒，利用昆蟲細胞桿狀病毒表達系統(tǒng)，進行初步的蛋白表達，為發(fā)展安全、有效、穩(wěn)定的流感通用疫苗奠定基礎。
　　方法與結果：
　　1．將甲型流感病毒M2e基因序列設計在引物上，利用PCR技術分別與HBC和HPV16L1相連。將M2e-HBC和M2e-HPV16L1序列分別克隆到供體

3、質粒pFastBacHTA上，構建兩個重組質粒，分別為M2e-HBC-pFastBacHTA和M2e-HPV16L1-pFastBacHTA。
　　2．用E.coliDH10Bac中的穿梭載體Bacmid與重組質粒轉座，使含有M2e-HBC和M2e-HPV16L1基因的表達盒插入Bacmid的attTn7的接受位點，獲得重組Bacmid。
　　3．將挑選的陽性重組子DNA轉染sf9細胞，取上清和細胞，上清繼續(xù)擴增病毒，用空斑

4、試驗測定病毒效價；免疫熒光法檢測蛋白表達；細胞做破胞處理后，將上清和裂解液進行SDS-PAGE分析；將感染病毒的細胞裂解后透射電鏡觀察。結果證明，M2e-HBC和M2e-HPV16L1基因有蛋白表達，而對照呈現(xiàn)陰性；電鏡可見細胞內病毒樣顆粒（VLP）形成。
　　結論：
　　構建了含有M2e-HBC和M2e-HPV16L1的桿粒。利用Bac-to-Bac桿狀病毒表達系統(tǒng)，將構建好的桿粒轉染sf9昆蟲細胞，得到含有重組桿狀病毒的