密碼子優(yōu)化型HPV16L1基因在兩種昆蟲細胞中的表達研究.pdf

1、目的:提高16型人乳頭瘤病毒(HPV16)L1基因以桿狀病毒為載體，在昆蟲細胞中的表達水平，為研制預防性HPV疫苗奠定基礎。 方法:根據(jù)昆蟲細胞密碼子偏性對野生型HPV16L1基因進行改造，全基因合成密碼子優(yōu)化型HPV16L1基因，利用Bac-To—Bac表達系統(tǒng)獲得重組桿狀病毒，感染昆蟲細胞Sf9和HighFive。Westernblot鑒定表達產(chǎn)物；電鏡下觀察病毒樣顆粒形成。利用ELISA法評價HPV16L1基因的優(yōu)化效果

2、，并探討L1蛋白在兩種昆蟲細胞中表達的最佳條件。 結(jié)果:Sf9和HighFive細胞的表達產(chǎn)物經(jīng)Westernblot檢測，在相對分子質(zhì)量56kD處均出現(xiàn)HPV16L1的特異性條帶；電鏡下可見病毒樣顆粒在兩種昆蟲細胞的核內(nèi)形成；ELISA法結(jié)果顯示密碼子優(yōu)化型HPV16L1基因的表達水平顯著高于野生型(P<0.01)。HighFive細胞表達的最佳條件為MOI=10，表達時相72h，其L1蛋白表達量至少比Sf9細胞高3倍。