表達(dá)密碼子優(yōu)化的HPV16 E7的重組李斯特菌的構(gòu)建及其抗腫瘤特性研究.pdf

1、段斐斐：表達(dá)密碼子優(yōu)化的HPVl6E7的重組李斯特菌的構(gòu)建及其抗腫瘤特性研究表達(dá)密碼子優(yōu)化的HPVl6E7的重組李斯特菌的構(gòu)建及其抗腫瘤特性研究研究生：段斐斐導(dǎo)師：焦新安教授殷月蘭副教授中文摘要宮頸癌是引發(fā)發(fā)展中國(guó)家婦女高死亡率的一個(gè)主要原因，嚴(yán)重影響了全球女性健康。人乳頭瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)的持續(xù)感染是誘發(fā)宮頸癌的主要病因，經(jīng)鑒定HPV的DNA存在于99％以上的宮頸癌患者體內(nèi)。HPV原癌蛋白E6、E

2、7相互作用使得主要細(xì)胞調(diào)節(jié)蛋白功能失活，從而干擾細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、凋亡，導(dǎo)致細(xì)胞過(guò)度增殖引起癌變；通常將E6、E7作為宮頸癌免疫治療的靶抗原。目前預(yù)防宮頸癌的疫苗已問(wèn)世，預(yù)防性疫苗的出現(xiàn)可以降低世界范圍內(nèi)宮頸癌的發(fā)生，但是對(duì)于已發(fā)宮頸癌無(wú)治療性作用。因此，宮頸癌治療性疫苗的研究顯得尤為重要。單核細(xì)胞增生性李斯特菌(Listeriamonocytogenes，簡(jiǎn)稱LM)是一種兼性胞內(nèi)寄生菌，能直接感染抗原遞呈細(xì)胞，使所運(yùn)送的外源抗原可以同時(shí)

3、進(jìn)入MHCI類和MHCII類抗原遞呈途徑，從而誘導(dǎo)強(qiáng)烈的CD8T細(xì)胞和CD4T細(xì)胞免疫應(yīng)答。目前，減毒李斯特菌作為一種新型的活疫苗載體，在抗腫瘤治療中顯示出誘人的前景。本研究以單核細(xì)胞增生性李斯特菌LM4為運(yùn)送載體，通過(guò)同源重組的方法，成功地獲得能夠分泌表達(dá)密碼子優(yōu)化的HPVl6E7的減毒重組李斯特菌LM4ahly：：E71及LM4Ahly：：E73，在對(duì)這兩株疫苗候選株的生長(zhǎng)特性、穩(wěn)定性、溶血活性及免疫反應(yīng)性進(jìn)行研究的基礎(chǔ)上，以荷瘤小

4、鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，對(duì)疫苗的安全性、治療性效力及抗腫瘤機(jī)制進(jìn)行了相關(guān)研究。1表達(dá)密碼子優(yōu)化的HPVl6E7的減毒重組李斯特菌的構(gòu)建與鑒定本研究首先將編碼HPVl6E7蛋白的密碼子全部替換成李斯特菌偏好性密碼子，新的編碼基因命名為E7J；并在此基礎(chǔ)上，將E7蛋白的24位和26位的氨基酸替換為甘氨酸(G)，編碼該蛋白的基因命名為E73。然后以LM4為運(yùn)送載體，通過(guò)同源重組的方法，段斐斐：表達(dá)密碼子優(yōu)化的HPVl6E7的重組李斯特菌的構(gòu)建及其抗

5、腫瘤特性研究3肽刺激下，LM4Ahly：：E71免疫組與LM4Ahly：：E7免疫組相比，能夠誘導(dǎo)小鼠淋巴細(xì)胞顯著性增殖(PO05)，而LM4Ahly：：E73免疫組與LM4Ahly：：E7免疫組相比，無(wú)顯著性差異。另外，細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，疫苗株均能誘導(dǎo)荷瘤小鼠產(chǎn)生較強(qiáng)的E7特異性的CTL活性，LM4Ahly：：E71免疫組產(chǎn)生的E7特異性的CTL效應(yīng)高于其他兩免疫組，而PBS組和LM4Ahly組小鼠體內(nèi)沒(méi)有產(chǎn)生