HPV16治療性無(wú)佐劑重組疫苗——Hsp65-E6-E7在大腸桿菌中的表達(dá)、純化及其功能研究.pdf

1、　　目的：構(gòu)建HPV16無(wú)佐劑治療性重組蛋白疫苗Hsp65-E6/E7表達(dá)載體，篩選穩(wěn)定的高表達(dá)該疫苗的菌株，優(yōu)化Hsp65-E6/E7重組蛋白疫苗的純化和復(fù)性技術(shù)條件，研究該疫苗抗HPV16型病毒相關(guān)腫瘤的生物學(xué)效應(yīng)。方法：通過(guò)PCR技術(shù)自我國(guó)山西宮頸癌高發(fā)現(xiàn)場(chǎng)分離到的毒株-HPV16Z中獲得E6/E7轉(zhuǎn)化基因片段，自卡介苗菌株中克隆獲得Hsp65基因片段；對(duì)E6/E7基因片段定點(diǎn)突變修飾，以消除該轉(zhuǎn)化基因的致癌潛能；構(gòu)建ET28a-

2、Hsp65-E6/E7表達(dá)載體，在大腸桿菌BL21(DE3)中表達(dá)融合蛋白，并篩選穩(wěn)定的高表達(dá)菌株；研究影響Hsp65-E6/E7重組蛋白疫苗的表達(dá)條件；研究和初步建立重組蛋白疫苗的純化方案和工藝；研究重組蛋白疫苗誘導(dǎo)的細(xì)胞特異性免疫反應(yīng)和該疫苗對(duì)小鼠TC-1腫瘤細(xì)胞移植瘤的體內(nèi)治療作用。結(jié)論：獲得穩(wěn)定高表達(dá)Hsp65-E6/E7重組蛋白疫苗的大腸桿菌BL21(DE3)株；優(yōu)化了發(fā)酵、表達(dá)、復(fù)性和純化工藝，使該疫苗純度達(dá)95％以上；體外