丁苯酞注射液預(yù)處理通過(guò)NF-kB信號(hào)通路對(duì)大鼠腦制備再灌注損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的:采用丁苯酞(dl-3-n-butylphthalide，NBP)注射液預(yù)處理的方法，應(yīng)用Sprague-Dawley(SD)大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞后再灌注(MCAO/R)模型，通過(guò)神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損評(píng)估，腦梗死體積測(cè)定，腦組織內(nèi)細(xì)胞形態(tài)觀察，檢測(cè)腦組織內(nèi)核轉(zhuǎn)錄因子κB(NF-κB)、細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1)表達(dá)的變化，探討丁苯酞注射液預(yù)處理是否可通過(guò)NF-κB信號(hào)通路對(duì)腦缺血再灌注損傷發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用及其可能的機(jī)制。
　

2、　方法:健康成年SD大鼠共36只，體重250-280g，隨機(jī)分為3組，分別為假手術(shù)組、腦缺血再灌注組（模型組）、丁苯酞注射液預(yù)處理后腦缺血再灌注組（丁苯酞預(yù)處理組），每組各12只。假手術(shù)組僅暴露并分離右側(cè)頸總動(dòng)脈后縫合;模型組及丁苯酞預(yù)處理組參照Z(yǔ)ea-Longa線栓法制作右側(cè)大腦中動(dòng)脈缺血的MCAO模型，并在缺血2h后，予再灌注24h，制成MCAO/R模型;其中丁苯酞預(yù)處理組在術(shù)前1周采用藥物腹腔注射的預(yù)處理方法，給予200mg/kg

3、/d丁苯酞注射液預(yù)處理給藥，其余兩組術(shù)前1周予等體積生理鹽水腹腔注射。
　　應(yīng)用Zea-Longa5分制對(duì)大鼠神經(jīng)功能缺損進(jìn)行評(píng)分;應(yīng)用TTC染色觀察并計(jì)算腦梗死體積;應(yīng)用HE染色法觀察腦組織細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu);采用免疫組織化學(xué)檢測(cè)法觀察腦組織中NF-κB/p65、ICAM-1表達(dá)的變化。
　　結(jié)果:
　　1.大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分:假手術(shù)組未觀察到神經(jīng)功能缺損癥狀（0分）;模型組和丁苯酞預(yù)處理組均出現(xiàn)神經(jīng)功能缺損癥狀（1-3

4、分），且此差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);丁苯酞預(yù)處理組神經(jīng)功能缺損評(píng)分低于模型組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2.大鼠腦梗死體積測(cè)定（TTC染色法）:三組大鼠腦組織均經(jīng)TTC染色后，肉眼觀察，假手術(shù)組整個(gè)腦片呈均勻紅色，無(wú)白色區(qū)域;模型組及丁苯酞預(yù)處理組右側(cè)大腦中動(dòng)脈供血區(qū)可見(jiàn)明顯白色梗死灶(P＜0.01);與模型組相較，丁苯酞預(yù)處理組白色梗死灶體積較小，差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3.大鼠

5、腦組織HE染色:光鏡下觀察，假手術(shù)組細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，細(xì)胞大而圓，排列緊密，層次分明;模型組梗死區(qū)細(xì)胞體積縮小，出現(xiàn)細(xì)胞核固縮、裂解等，細(xì)胞胞漿空泡形成，細(xì)胞排列紊亂，組織間水腫;丁苯酞預(yù)處理組鏡下可見(jiàn)部分細(xì)胞有體積縮小，細(xì)胞核固縮等現(xiàn)象，與模型組相比，變性細(xì)胞數(shù)量較少，細(xì)胞排列較規(guī)整，細(xì)胞受損程度較輕，組織間水腫程度較輕。
　　4.大鼠腦切片免疫組織化學(xué)檢測(cè):假手術(shù)組僅見(jiàn)少量NF-κB/p65、ICAM-1陽(yáng)性細(xì)胞;與假手術(shù)組相

6、較，模型組及丁苯酞預(yù)處理組NF-κB/p65、ICAM-1陽(yáng)性細(xì)胞百分比明顯升高，且差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);丁苯酞預(yù)處理組較模型組NF-κB/p65、ICAM-1陽(yáng)性表達(dá)率降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.NF-κB/p65、ICAM-1的表達(dá)參與了腦缺血再灌注損傷過(guò)程。其中NF-κB/p65表達(dá)的增加，即NF-κB信號(hào)通路的激活，通過(guò)誘導(dǎo)其下游基因產(chǎn)物生成，介導(dǎo)了微循環(huán)障礙、炎

7、癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡等多個(gè)環(huán)節(jié)來(lái)加重缺血再灌注損傷;作為NF-κB信號(hào)通路的下游產(chǎn)物之一的ICAM-1通過(guò)介導(dǎo)的白細(xì)胞間及其與血管內(nèi)皮細(xì)胞的粘附，加重缺血再灌注時(shí)微循環(huán)障礙及炎癥反應(yīng)，加重腦損害。
　　2.丁苯肽藥物預(yù)處理可減輕SD大鼠腦缺血再灌注損傷程度，減輕神經(jīng)功能缺損癥狀，使梗死灶體積縮小，使神經(jīng)細(xì)胞變性、壞死的數(shù)量減少，其機(jī)制之一是通過(guò)抑制NF-κB信號(hào)通路，減少該通路下游基因產(chǎn)物ICAM-1，減輕缺血再灌注時(shí)微循環(huán)障礙及炎癥