砷代謝相關酶基因多態(tài)性與地方性砷中毒易感性的關系研究.pdf

1、本文研究目的：探討參與砷代謝過程的三種代謝酶：谷胱甘肽S轉移酶Omegal-1(GST01-1)、嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)、三價砷甲基轉移酶(AS3MT/CYT19)的基因多態(tài)性與地方性砷中毒易感性的關系。 研究方法：選擇山西省朔州市3個相鄰自然村，根據WS/T2000地方性砷中毒診斷標準在長期居住的村民中選取79例慢性砷中毒患者做為病例組，同時選取相同地域無地方性砷中毒臨床表現者110例做為對照組。對所有研究對象的一般情況、

2、飲水年限、吸煙史、飲酒史、營養(yǎng)狀況、家族史、既往史、自覺癥狀等進行問卷調查；采集研究對象的尿液和血樣，利用高效液相色譜一等離子耦合質譜儀(HPLC-ICP-MS)對尿液和血清中的砷代謝產物進行測定；提取研究對象基因組DNA，利用聚合酶鏈反應一單鏈構象多態(tài)性(PCR-SSCP)技術對三種代謝酶的基因突變情況進行初篩，并進一步對出現異常條帶類型的PCR產物進行直接DNA測序，以確定突變位點及類型。采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行t檢驗、方差

3、分析、x<'2>檢驗、Logistic回歸分析等。 研究結果： 1.GSTO1-1基因第4外顯子上多態(tài)性與地方性砷中毒易感性的關系：病例組131位密碼子新的沉默突變(ATT→ATC)的發(fā)生率(2.5％)高于對照組(1.8％)；病例組140位密碼子GCT→GAT突變的發(fā)生率(38.0％)高于對照組(32.7％)；病例組155位密碼子GAG→GA/TG新突變的發(fā)生率(3.8％)高于對照組(2.7％)，但以上三種突變差異均無統(tǒng)

4、計學意義(P>0.05)。 2.PNP基因第2外顯子上多態(tài)性與地方性砷中毒易感性的關系：病例組15位密碼子GAA→AAA新突變、51位密碼子GGT→C/AGT新突變和51位密碼子GGT→AGT突變的發(fā)生率(11.4％)均低于對照組(19.1％)；病例組20位密碼子CAC→CAT突變的發(fā)生率(10.1％)低于對照組(17.3％)；病例組57位密碼子CCC→CCT突變的發(fā)生率(22.8％)低于對照組(38.2％)，但五種突變差異均無

5、統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 3.AS3MT基因第8內含子和第9外顯子上多態(tài)性與地方性砷中毒易感性的關系：病例組第8內含子上9149位堿基A→C突變的發(fā)生率(19.0％)低于對照組(23.6％)；病例組287位密碼子ATG→AT/CG新突變的發(fā)生率(10.1％)低于對照組(11.8％)，但差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 4.病例組和對照組人群血清中砷代謝產物比較只有DMA有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，其余代謝產物：

6、As<'Ⅲ>、As<'Ⅴ>、MMA比較均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；病例組血清中As<'Ⅲ>和As<'Ⅴ>的比值(3.78)高于對照組(1.21)；病例組血清中DMA和MMA的比值(4.81)低于對照組(7.81)。 5.病例組和對照組人群尿液中砷代謝產物As<'Ⅲ>、As<'Ⅴ>、MMA和DMA比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；病例組尿液中As<'Ⅲ>和As<'Ⅴ>的比值(1.44)高于對照組(1.17)；病例組尿液中DMA和

7、MMA的比值(11.32)低于對照組(13.32)。 研究結論： 1.本研究發(fā)現五種新的多態(tài)性位點和類型：GSTO1-1基因第4外顯子131位密碼子ATT→ATC突變和155位密碼子GAG→GA/TG突變；PNP基因第2外顯子15位密碼子GAA→AAA突變和51位密碼子GGT→C/AGT突變；AS3MT基因第9外顯子287位密碼子ATG→AT/CG突變。 2.病例組GSTO1-1基因第4外顯子上131位密碼子AT

8、T→ATC、140位密碼子GCT→GAT、155位密碼子GAG→GA/TG三個位點的突變率病例組均有增加的趨勢；而PNP基因第2外顯子上15位密碼子GAA→AAA、20位密碼子CAC→CAT、51位密碼子GGT→C/AGT、51位密碼子GGT→AGT、57位密碼子CCC→CCT五種突變發(fā)生率均是病例組低于對照組的趨勢；和PNP相同，病例組與對照組比較，AS3MT基因第8內含子上9149位堿基A→C和第9外顯子上287位密碼子ATG→AT

9、/CG的多態(tài)性發(fā)生率也出現降低趨勢。雖然，GSTO1-1、PNP和AS3MT基因的多態(tài)性在兩組之間均無統(tǒng)計學差異，但并不表明各多態(tài)性與地方性砷中毒易感性無關。出現這種情況的原因可能與分析的樣本量較小，或者是有關的多態(tài)性位點在GSTO1-1、PNP和AS3MT基因的其他的外顯子或非編碼區(qū)上有關。故有待增加樣本數和進行全基因序列研究進一步證實。 3.病例組血清和尿液中As<'Ⅲ>/As<'Ⅴ>的值均高于對照組，結合病例組PNP基因第