砷代謝相關(guān)酶基因多態(tài)性與地方性砷中毒易感性的關(guān)系研究.pdf

1、本文研究目的：探討參與砷代謝過程的三種代謝酶：谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶Omegal-1(GST01-1)、嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)、三價(jià)砷甲基轉(zhuǎn)移酶(AS3MT/CYT19)的基因多態(tài)性與地方性砷中毒易感性的關(guān)系。 研究方法：選擇山西省朔州市3個(gè)相鄰自然村，根據(jù)WS/T2000地方性砷中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)在長(zhǎng)期居住的村民中選取79例慢性砷中毒患者做為病例組，同時(shí)選取相同地域無(wú)地方性砷中毒臨床表現(xiàn)者110例做為對(duì)照組。對(duì)所有研究對(duì)象的一般情況、

2、飲水年限、吸煙史、飲酒史、營(yíng)養(yǎng)狀況、家族史、既往史、自覺癥狀等進(jìn)行問卷調(diào)查；采集研究對(duì)象的尿液和血樣，利用高效液相色譜一等離子耦合質(zhì)譜儀(HPLC-ICP-MS)對(duì)尿液和血清中的砷代謝產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)定；提取研究對(duì)象基因組DNA，利用聚合酶鏈反應(yīng)一單鏈構(gòu)象多態(tài)性(PCR-SSCP)技術(shù)對(duì)三種代謝酶的基因突變情況進(jìn)行初篩，并進(jìn)一步對(duì)出現(xiàn)異常條帶類型的PCR產(chǎn)物進(jìn)行直接DNA測(cè)序，以確定突變位點(diǎn)及類型。采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、方差

3、分析、x<'2>檢驗(yàn)、Logistic回歸分析等。 研究結(jié)果： 1.GSTO1-1基因第4外顯子上多態(tài)性與地方性砷中毒易感性的關(guān)系：病例組131位密碼子新的沉默突變(ATT→ATC)的發(fā)生率(2.5％)高于對(duì)照組(1.8％)；病例組140位密碼子GCT→GAT突變的發(fā)生率(38.0％)高于對(duì)照組(32.7％)；病例組155位密碼子GAG→GA/TG新突變的發(fā)生率(3.8％)高于對(duì)照組(2.7％)，但以上三種突變差異均無(wú)統(tǒng)

4、計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 2.PNP基因第2外顯子上多態(tài)性與地方性砷中毒易感性的關(guān)系：病例組15位密碼子GAA→AAA新突變、51位密碼子GGT→C/AGT新突變和51位密碼子GGT→AGT突變的發(fā)生率(11.4％)均低于對(duì)照組(19.1％)；病例組20位密碼子CAC→CAT突變的發(fā)生率(10.1％)低于對(duì)照組(17.3％)；病例組57位密碼子CCC→CCT突變的發(fā)生率(22.8％)低于對(duì)照組(38.2％)，但五種突變差異均無(wú)

5、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 3.AS3MT基因第8內(nèi)含子和第9外顯子上多態(tài)性與地方性砷中毒易感性的關(guān)系：病例組第8內(nèi)含子上9149位堿基A→C突變的發(fā)生率(19.0％)低于對(duì)照組(23.6％)；病例組287位密碼子ATG→AT/CG新突變的發(fā)生率(10.1％)低于對(duì)照組(11.8％)，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 4.病例組和對(duì)照組人群血清中砷代謝產(chǎn)物比較只有DMA有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其余代謝產(chǎn)物：

6、As<'Ⅲ>、As<'Ⅴ>、MMA比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；病例組血清中As<'Ⅲ>和As<'Ⅴ>的比值(3.78)高于對(duì)照組(1.21)；病例組血清中DMA和MMA的比值(4.81)低于對(duì)照組(7.81)。 5.病例組和對(duì)照組人群尿液中砷代謝產(chǎn)物As<'Ⅲ>、As<'Ⅴ>、MMA和DMA比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；病例組尿液中As<'Ⅲ>和As<'Ⅴ>的比值(1.44)高于對(duì)照組(1.17)；病例組尿液中DMA和

7、MMA的比值(11.32)低于對(duì)照組(13.32)。 研究結(jié)論： 1.本研究發(fā)現(xiàn)五種新的多態(tài)性位點(diǎn)和類型：GSTO1-1基因第4外顯子131位密碼子ATT→ATC突變和155位密碼子GAG→GA/TG突變；PNP基因第2外顯子15位密碼子GAA→AAA突變和51位密碼子GGT→C/AGT突變；AS3MT基因第9外顯子287位密碼子ATG→AT/CG突變。 2.病例組GSTO1-1基因第4外顯子上131位密碼子AT

8、T→ATC、140位密碼子GCT→GAT、155位密碼子GAG→GA/TG三個(gè)位點(diǎn)的突變率病例組均有增加的趨勢(shì)；而PNP基因第2外顯子上15位密碼子GAA→AAA、20位密碼子CAC→CAT、51位密碼子GGT→C/AGT、51位密碼子GGT→AGT、57位密碼子CCC→CCT五種突變發(fā)生率均是病例組低于對(duì)照組的趨勢(shì)；和PNP相同，病例組與對(duì)照組比較，AS3MT基因第8內(nèi)含子上9149位堿基A→C和第9外顯子上287位密碼子ATG→AT

9、/CG的多態(tài)性發(fā)生率也出現(xiàn)降低趨勢(shì)。雖然，GSTO1-1、PNP和AS3MT基因的多態(tài)性在兩組之間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但并不表明各多態(tài)性與地方性砷中毒易感性無(wú)關(guān)。出現(xiàn)這種情況的原因可能與分析的樣本量較小，或者是有關(guān)的多態(tài)性位點(diǎn)在GSTO1-1、PNP和AS3MT基因的其他的外顯子或非編碼區(qū)上有關(guān)。故有待增加樣本數(shù)和進(jìn)行全基因序列研究進(jìn)一步證實(shí)。 3.病例組血清和尿液中As<'Ⅲ>/As<'Ⅴ>的值均高于對(duì)照組，結(jié)合病例組PNP基因第