半胱氨酸蛋白酶-3和多聚（ADP-核糖）聚合酶-1在過度訓(xùn)練致急性腎損傷中的表達(dá)及山莨菪堿干預(yù)的影響.pdf

1、目的：過度訓(xùn)練可引起急性腎臟損傷，但其發(fā)病機(jī)制尚未完全明了。最近的研究認(rèn)為細(xì)胞凋亡是過度訓(xùn)練致急性腎臟損傷的主要發(fā)病機(jī)制，然而，過度訓(xùn)練致腎組織細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制尚未闡明，目前臨床上尚缺乏有效的防治措施。本研究應(yīng)用大鼠游泳至力竭建立過度訓(xùn)練致急性腎損傷模型，觀察過度訓(xùn)練大鼠腎組織病理變化，檢測腎組織中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量以及半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表達(dá)和多聚(ADP-核糖)聚合酶-1(PA

2、RP-1)的表達(dá)和切割滅活的變化，觀察山莨菪堿對上述變化的影響，旨在加深對過度訓(xùn)練致急性腎損傷發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識，為其防治提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：(1)選取36只健康雄性Wistar大鼠，體重200-220g。將大鼠隨機(jī)分為正常對照組(CN)、力竭組(ES)及山莨菪堿干預(yù)組(AD)。CN組為安靜對照組，未進(jìn)行力竭運(yùn)動；根據(jù)力竭后恢復(fù)時間不同將ES組分為即刻組(ESI)、6小時組(ES6h)和24小時組(ES24h)；AD組于運(yùn)動

3、前10分鐘腹腔注射山莨菪堿(10mg/Kg)后進(jìn)行力竭運(yùn)動，分為山莨菪堿6小時組(AD6h)和山莨菪堿24小時組(AD24h)。每時間點(diǎn)均為6只大鼠。(2)采用大鼠無負(fù)重游泳至力竭建立過度訓(xùn)練致急性腎損傷模型。(3)各組大鼠于相應(yīng)時間點(diǎn)應(yīng)用乙醚吸入麻醉，均留取各組大鼠左腎置于4％多聚甲醛中固定，備行石蠟切片；取各組大鼠右腎沿縱切面均分為兩部分，置于-80℃冰箱保存，待行SOD活性、MDA含量檢測及western blot檢測。(4)分別

4、應(yīng)用黃嘌呤氧化酶法及硫代巴比妥酸法檢測腎組織勻漿中SOD活性及MDA含量。(5)采用HE染色光鏡下觀察腎組織形態(tài)學(xué)變化。(6)采用免疫組化SP及PV法觀察PARP-1和caspase-3表達(dá)情況。(7)應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)對免疫組化結(jié)果進(jìn)行半定量分析。(8)應(yīng)甩western blot檢測PARP-1裂解情況。(9)所有數(shù)據(jù)均采用SPSS for Window 11.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計分析，P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果：(1)

5、力竭后即刻及6小時組大鼠腎組織在光鏡下可見部分腎小球球囊及腎小管擴(kuò)張，皮髓質(zhì)交界處可見淤血現(xiàn)象，力竭后24小時大鼠腎組織中可以觀察到部分。腎小管上皮細(xì)胞刷狀緣不規(guī)整，有的出現(xiàn)脫落。山莨菪堿干預(yù)組大鼠腎組織結(jié)構(gòu)無明顯變化。(2)力竭運(yùn)動后即刻腎臟SOD活性有所降低(P<0.05)，至力竭后6小時降低最為明顯(P<0.05)，力竭后24小時有所回升，但仍低于正常對照組(P<0.05)。山莨菪堿干預(yù)6小時組腎臟SOD活性高于單純力竭組(P<0

6、.05)，與正常對照組相比無差異(P>0.05)，山莨菪堿干預(yù)24小時組腎臟SOD也高于單純力竭組(P<0.05)，與正常對照組相比無差異(P>0.05)。力竭運(yùn)動后即刻腎臟MDA含量有所升高(P<0.05)，至力竭后6小時升高最為明顯(P<0.05)，力竭后24小時有所下降，仍高于正常對照組水平(P<0.05)。山莨菪堿干預(yù)6小時組腎臟MDA含量低于單純力竭組(P<0.05)，但仍高于正常對照組(P<0.05)，山莨菪堿干預(yù)24小時組

7、腎臟MDA稍：低于單純力竭組，與正常對照組相比無差異(P>0.05)。(3)力竭運(yùn)動后caspase-3的表達(dá)隨力竭后恢復(fù)時間的延長而逐漸增強(qiáng)，各力竭組同正常對照組相比均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，山莨菪堿干預(yù)組明顯降低力竭運(yùn)動后caspase-3的表達(dá)(P<0.05)。(4)正常對照組PARP-1僅為弱表達(dá)，力竭運(yùn)動即刻其表達(dá)較對照組增強(qiáng)(P<0.05)，western blot顯示裂解片斷不明顯，力竭運(yùn)動后6小時及24小時表達(dá)繼續(xù)

8、增強(qiáng)，且裂解片斷逐漸增加，山莨菪堿干預(yù)組PARP-1的表達(dá)及裂解片斷均較同期單純力竭組明顯減弱(P<0.05)，但仍強(qiáng)于正常對照組。 結(jié)論：(1)力竭運(yùn)動后腎組織SOD活性下降，MDA含量上升，說明氧化應(yīng)激在過度訓(xùn)練致急性腎損傷中發(fā)揮重要作用。(2)力竭后腎組織caspase-3的表達(dá)隨力竭運(yùn)動后時間延長而增強(qiáng)，PARP-1在力竭運(yùn)動后表達(dá)也增強(qiáng)，但力竭后即刻裂解片斷不明顯，力竭后6小時及24小時裂解片斷逐漸增加。說明Caspa