靶向半胱氨酸組織蛋白酶家族的溶酶體探針的研究.pdf

1、溶酶體在細(xì)胞各種生命活動(dòng),包括物質(zhì)代謝、細(xì)胞膜循環(huán)、細(xì)胞凋亡中發(fā)揮著重要作用,如果它發(fā)生功能紊亂,會(huì)造成諸如腫瘤、炎癥、矽肺等多種疾病的產(chǎn)生。實(shí)現(xiàn)對(duì)溶酶體的標(biāo)記,直觀地檢測(cè)物質(zhì)在溶酶體的定位改變,不僅能夠幫助理解溶酶體參與生命活動(dòng)的分子機(jī)制,而且對(duì)疾病的治療具有重要的指導(dǎo)意義。
　　本課題利用基于活性組織蛋白酶家族的透膜小分子探針(CpFABPs),結(jié)合活性組織蛋白酶家族位于溶酶體的特點(diǎn),發(fā)展CpFABPs成為一種新型的溶酶體標(biāo)記

2、探針。
　　以LysoTracker熒光探針為標(biāo)準(zhǔn)物,經(jīng)過(guò)共定位分析,課題證實(shí)CpFABPs在不同的細(xì)胞系都能實(shí)現(xiàn)對(duì)溶酶體的標(biāo)記,而且即使轉(zhuǎn)變CpFABPs的熒光基團(tuán),這種標(biāo)記也幾乎不受影響。在細(xì)胞裂解液和活細(xì)胞水平,通過(guò)直接標(biāo)記或抑制劑的競(jìng)爭(zhēng)性標(biāo)記分析,本文確認(rèn)CpFABPs標(biāo)記溶酶體的機(jī)制在于其對(duì)活性組織蛋白酶家族的特異性標(biāo)記作用。CpFABPs共價(jià)結(jié)合組織蛋白酶的作用不易被破壞,因此其被成功地應(yīng)用于固定細(xì)胞、透化細(xì)胞和氯化銨