金黃色葡萄球菌的分子分型及其Panton—Valentine殺白細(xì)胞素基因的克隆與表達(dá).pdf

1、目的：了解我院致血流感染金黃色葡萄球菌的分子流行病學(xué)特征；篩查血流感染金黃色葡萄球菌Panton-Valentine殺白細(xì)胞素基因（pvl基因）攜帶情況；構(gòu)建lukS-PV和lukF-PV基因表達(dá)載體，并在大腸桿菌中表達(dá)相應(yīng)蛋白。
　　 方法：收集2006年1月至2008年12月期間我院臨床分離的致血流感染金黃色葡萄球菌菌株（共47株），標(biāo)本來源均為患者靜脈血。瓊脂平板稀釋法檢測所有菌株對多種抗菌藥物的耐藥性，PCR方法檢測pv

2、l基因，應(yīng)用DiversiLabTM Rep-PCR菌株分型系統(tǒng)進(jìn)行菌株的同源性分析；對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA）進(jìn)行葡萄球菌染色體mec（SCCmec）分型、脈沖場凝膠電泳（Pulse-field Electrophoresis，PFGE）分型以及ST239型別的快速篩查；綜合分型結(jié)果和藥敏試驗結(jié)果，挑選部分代表菌株進(jìn)行多位點序列分型（M

3、ultilocus Sequence Typing，MLST）。通過分子生物學(xué)技術(shù)，克隆并表達(dá)lukS-PV和lukF-PV基因。
　　 結(jié)果：47株致血流感染金黃色葡萄球菌菌株中，pvl基因檢出率為4.3％（2/47）。MRSA24株，占51.1％，所有MRSA均為SCCmecⅢ型菌株，其中22株（91.67％）為ST239；DiversiLabTM Rep-PcR菌株分型系統(tǒng)將47株金黃色葡萄球菌分為A-L共12個型，其中A

4、型為最主要的型，共22株，占46.8％，所有的MRSA均屬于A、B兩型；脈沖場凝膠電泳技術(shù)將MRSA分為A～F共6個型別，A型有A1～A6六個亞型，B型有2個亞型。成功克隆lukS-PV和lukF-PV基因，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒lukF-PV-pET28a（+）和lukS-PV-pET28a（+），在宿主菌BL21中表達(dá)重組蛋白取得初步成功。
　　 結(jié)論： 2006年1月至2008年12月我院分離的臨床血流感染金黃色葡萄球菌中甲氧西