CITP中T細胞的活性氧水平及在JAK2-STAT3參與下免疫調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、目的：
　　 1.研究臨床健康人、CITP患者外周血T細胞中活性氧(ROS)水平。
　　 2.探討CITP患者外周血T淋巴細胞JAK2/STAT3-mRNA的表達，分析其在CITP患者和正常人中的差異。
　　 3.探討活性氧與JAK2/STAT3的相關(guān)性。
　　 4.為臨床上治療CITP新藥物和靶點提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.外周血T淋巴細胞的分離
　　 無菌采集患者及

2、正常健康人的外周靜脈血5 ml，肝素抗凝放于無菌玻璃培養(yǎng)皿內(nèi)在37℃下培養(yǎng)30分鐘，去除黏附于玻璃培養(yǎng)皿的單核細胞，以獲取懸浮的淋巴細胞。加入0.85％NH4Cl溶液溶解紅細胞，經(jīng)T細胞分離富聚柱采用負(fù)篩選法獲得獲純化的T細胞。加入10％新生牛血漿Hanks液重懸T細胞，調(diào)整T細胞濃度至2×106/ml。FITC標(biāo)記的抗CD3單克隆抗體檢測其純度，臺盼藍拒染法檢測其活性。
　　 2.流式細胞術(shù)檢測外周血T淋巴細胞的活性氧

3、　　 分別取30例CITP患者和健康人的外周血，經(jīng)上述分離純化得T淋巴細胞后，CITP實驗組和健康對照組同時加入熒光探針CM-H2DC-FDA。在37℃下避光保存，在搖床上振搖30min以充分反應(yīng)。采用激發(fā)波長488nm和發(fā)射波長520nm的流式細胞儀檢測DCF熒光強度。每次監(jiān)測數(shù)據(jù)即為所得的結(jié)果。
　　 3.外周血T淋巴細胞JAK2/STAT3mRNA水平的檢測
　　 選20例CITP患者作為實驗組和20例正常健康人

4、作為對照組，應(yīng)用實時定量RT-PCR方法對T淋巴細胞JAK3/STAT3-mRNA進行定量檢測，分析JAK2/STAT3-mRNA在實驗組與對照組之間表達的差異及JAK2/STAT3-mRNA的表達與活性氧的關(guān)系。
　　 結(jié)果：
　　 1.與正常對照組相比，CITP患者外周血T細胞中的ROS含量明顯增高。
　　 2.JAK2/STAT3經(jīng)實時定量RT-PCR檢測，發(fā)現(xiàn)CITP患者外周血T淋巴細胞中JAK2/STA

5、T3-mRNA表達高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。
　　 3.CITP患者外周血T淋巴細胞中，活性氧與JAK2/STAT3-mRNA的表達呈正相關(guān)(P<0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1.CITP患者外周血T細胞的ROS水平明顯增高，可能參與了CITP的發(fā)生發(fā)展。
　　 2.CITP患者外周血T細胞中JAK2/STAT3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的基因表達明顯高于健康者，提示JAK2/STAT3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)