二甲雙胍對多囊卵巢綜合征大鼠血清激素含量及卵巢局部細(xì)胞因子表達(dá)的影響.pdf

1、目的：以來曲唑誘導(dǎo)的多囊卵巢綜合征(Polycystic ovary syndrome,PCOS)動物模型為研究對象，探討胰島素樣生長因子-Ⅰ(Insulin-like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)和轉(zhuǎn)化生長因子-β1(Transforming growth factor-betal,TGF-β1)與PCOS大鼠卵巢病理結(jié)構(gòu)改變之間的關(guān)系，并探討二甲雙胍對PCOS大鼠的治療作用并分析其可能的作用機制。
　　 方法

2、：
　　 1.PCOS大鼠動物模型的建立
　　 6周齡清潔級雌性Wistar大鼠40只，有4天的規(guī)律動情周期，適應(yīng)性喂養(yǎng)3天后隨機分為模型組(30只)和對照組(10只)。模型組每天給予來曲唑1mg/kg溶于1％羧甲基纖維素(Carboxmethlycellulose,CMC)中，連續(xù)灌服21天；對照組正常飼養(yǎng)，此期需每日監(jiān)測大鼠動情周期有無變化。造模完成后模型組隨機抽取10只，通過陰道涂片結(jié)果、血清激素水平和卵巢組織學(xué)多

3、囊變來評價造模效果，成功率＞80％時，將模型組剩余大鼠隨機分成二甲雙胍治療組(MF組)和PCOS組各10只。MF組每天給予二甲雙胍270mg/kg，用無菌蒸餾水溶解灌胃，PCOS組和對照組每天給予3ml無菌蒸餾水灌胃，連續(xù)14天。
　　 2.卵巢組織學(xué)檢查
　　 各組大鼠卵巢組織行石蠟包埋、切片、HE染色，光鏡下觀察其病理結(jié)構(gòu)。
　　 3.血清生殖激素及胰島素水平測定
　　 采用放射免疫法(Radio-i

4、mmunity approach,RIA)測定各組大鼠血清黃體生成素(Luteinizing hormone,LH)、卵泡刺激素(Follicle stimulating hormone,FSH)、雌二醇(Estradiol,E2)、孕酮(Progesterone,P)、睪酮(Testoterone,T)、胰島素(Insulin,INS)值。
　　 4.卵巢中IGF-Ⅰ、TGF-β1的表達(dá)
　　 采用免疫組織化學(xué)方法檢測

5、各組大鼠卵巢生長因子IGF-Ⅰ、TGF-β1的表達(dá)，并進(jìn)行圖象分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.動情周期的變化
　　 模型組在應(yīng)用來曲唑12天后動情周期失去規(guī)律性變化，提示無排卵。
　　 2.卵巢解剖學(xué)檢查
　　 PCOS組卵巢重量顯著高于對照組及MF組。解剖學(xué)觀察卵巢表面較蒼白，體積增大，可見較多囊狀擴張的卵泡。
　　 3.卵巢組織學(xué)檢查
　　 PCOS組鏡下見卵泡囊性擴張，少量卵

6、巢內(nèi)有黃體組織，顆粒細(xì)胞層數(shù)減少，僅為2～3層，顆粒細(xì)胞排列疏松，卵泡膜細(xì)胞層明顯增厚。MF組鏡下見顆粒細(xì)胞層數(shù)增加，卵泡膜細(xì)胞層變薄，黃體組織數(shù)量較PCOS組明顯增多。
　　 4.血清生殖激素及胰島素水平
　　 PCOS組血清T、LH、INS濃度高于對照組(P＜0.05)，血清E2、FSH、P濃度低于對照組(P＜0.05)；MF組血清T、LH、INS濃度低于PCOS組(P＜0.05)，血清E2、FSH、P濃度高于PCO

7、S組(P＜0.05)。
　　 5.IGF-Ⅰ在卵巢中的表達(dá)
　　 IGF-Ⅰ主要在卵巢組織的顆粒細(xì)胞、卵泡膜細(xì)胞表達(dá)，而間質(zhì)細(xì)胞不表達(dá)。PCOS組大鼠卵巢顆粒細(xì)胞IGF-Ⅰ表達(dá)水平明顯升高，與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，MF組顆粒細(xì)胞IGF-Ⅰ的表達(dá)相比PCOS組明顯下降(P＜0.05)。
　　 6.TGF-β1在卵巢中的表達(dá)
　　 TGF-β1強表達(dá)于原始和竇前卵泡卵母細(xì)胞胞漿，而在顆粒

8、細(xì)胞、卵泡膜細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞表達(dá)較弱。TGF-β1在PCOS組卵泡卵母細(xì)胞、顆粒細(xì)胞的表達(dá)強度與對照組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；而在卵泡膜細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)，PCOS組顯著高于對照組(P＜0.05)，MF組卵泡膜細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞TGF-β1的表達(dá)相比PCOS組明顯下降(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.應(yīng)用來曲唑(非甾體類芳香化酶抑制劑)所制備的PCOS大鼠模型，是一種理想的PCOS模型，可靠性強。