二甲雙胍對(duì)多囊卵巢綜合征卵巢顆粒細(xì)胞胰島素受體底物-1及其磷酸化表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　1.體外分離培養(yǎng)多囊卵巢綜合征（PCOS）和非PCOS患者黃素化顆粒細(xì)胞并用卵泡刺激素受體（FSHR)免疫熒光鑒定；
　　2.探討二甲雙胍（Met）對(duì)PCOS黃素化顆粒細(xì)胞胰島素受體底物-1（IRS-1）及p-ser307-IRS-1的信使核糖核酸（mRNA）及蛋白表達(dá)水平的影響。
　　方法：
　　分離純化體外培養(yǎng)的PCOS和非PCOS組黃素化顆粒細(xì)胞用FSHR免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定；添加Met處理培養(yǎng)

2、為實(shí)驗(yàn)組，添加類(lèi)胰島素生長(zhǎng)因子-1（IGF-1）為陽(yáng)性對(duì)照組，15％FBS-M199培養(yǎng)基中加入與Met等量PBS培養(yǎng)為陰性對(duì)照組；通過(guò)RT-PCR和real-time PCR檢測(cè)分析IRS-1mRNA的表達(dá)，細(xì)胞免疫熒光化學(xué)方法定性和Western-Blot定量檢測(cè)分析IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表達(dá)。SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理如果p<0.05表示差異有顯著意義。
　　結(jié)果：
　　1.FSHR蛋白免疫細(xì)胞

3、化學(xué)染色是鑒定顆粒細(xì)胞的特異性標(biāo)記物，F(xiàn)SHR陽(yáng)性染色定位于細(xì)胞胞漿和細(xì)胞膜，呈綠色熒光，細(xì)胞核呈藍(lán)色熒光，鏡下可見(jiàn)FSHR的陽(yáng)性率大于95%；
　　2.RT-PCR法擴(kuò)增出IRS-1的片段大小為134bp，real-time PCR分析結(jié)果顯示添加Met對(duì)PCOS組黃素化顆粒細(xì)胞IRS-1 mRNA表達(dá)顯著下調(diào)，與陽(yáng)性及陰性對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；
　　3.細(xì)胞免疫熒光化學(xué)檢測(cè)IRS-1及p-ser30

4、7-IRS-1蛋白陽(yáng)性表達(dá)定位在顆粒細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)；
　　4.Western-blot檢測(cè)Met作用24h后卵巢黃素化顆粒細(xì)胞IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表達(dá)下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)，灰度值分析結(jié)果顯示PCOS組卵巢黃素化顆粒細(xì)胞IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表達(dá)高于非PCOS組，添加Met組作用24h后PCOS組黃素化顆粒細(xì)胞IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表達(dá)較非PCOS組顯