馬哈利櫻桃矮化砧的DNA甲基化水平及模式初步分析.pdf

1、馬哈利‘CDR-1’砧木由于抗根癌病強(qiáng)又抗寒、耐鹽堿，適宜在中國(guó)北方地區(qū)種植推廣。矮化砧木有利于密植栽培，并能促進(jìn)早果，但馬哈利植株的矮化問(wèn)題一直沒(méi)有解決。
　　生物體可借助基因的甲基化參與基因的表達(dá)調(diào)控，尤其是啟動(dòng)子和編碼區(qū)的甲基化狀態(tài)，若其發(fā)生去甲基化，則可激活基因表達(dá)，反之，若其發(fā)生甲基化，則能抑制基因表達(dá)。已有實(shí)驗(yàn)證明，矮生型植株和正常植株的甲基化修飾狀態(tài)不同。MSAP是一種用途最廣泛的全基因組甲基化檢測(cè)工具，且MSAP技

2、術(shù)可以檢測(cè)不同品系植株的DNA甲基化差異。
　　本研究，從馬哈利‘CDR-1’自然狀態(tài)下自交后代中選擇較矮化的25棵植株（記為矮化組），并與普通高度馬哈利‘CDR-1’的25棵植株（記為半矮化組）作對(duì)比，借助MSAP技術(shù)得到它們的甲基化圖譜，進(jìn)而分析它們的甲基化水平及模式，以探討其矮化的表觀性狀與其基因組甲基化修飾的關(guān)系。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　1.優(yōu)化了酶切、預(yù)擴(kuò)增、選擇性擴(kuò)增體系，獲得了適宜于馬哈利砧木進(jìn)行MSAP分析的體系

3、。從64對(duì)選擇性引物組合中篩選出15對(duì)，獲得了馬哈利矮化組25株個(gè)體和半矮化組25株個(gè)體的MSAP擴(kuò)增圖譜。
　　2.15對(duì)引物在矮化組和半矮化組中共檢測(cè)到9021個(gè)條帶，平均每株個(gè)體檢測(cè)到180個(gè);半甲基化685個(gè)，平均每株個(gè)體檢測(cè)到14個(gè)，半甲基化率7.59％;全甲基化2657個(gè)，平均每株個(gè)體檢測(cè)到53個(gè)，全甲基化率29.45％。由此說(shuō)明馬哈利砧木基因組“CCGG”位點(diǎn)甲基化的主要方式為雙鏈內(nèi)側(cè)的全甲基化。半矮化組中共擴(kuò)增45

4、77個(gè)條帶，其中半甲基化336個(gè)，全甲基化1274個(gè);矮化組中共擴(kuò)增4444個(gè)條帶，其中半甲基化349個(gè)，全甲基化1383個(gè)。方差分析結(jié)果表明，矮化組與半矮化組在全甲基化水平和總甲基化水平上差異極顯著，在半甲基化水平上差異顯著，說(shuō)明矮化組的甲基化水平高于半矮化組。
　　3.對(duì)擴(kuò)增位點(diǎn)的甲基化模式分析結(jié)果表明，半矮化組總擴(kuò)增位點(diǎn)的85.53％是甲基化多態(tài)性位點(diǎn)，矮化組總擴(kuò)增位點(diǎn)的89.31％是甲基化多態(tài)性位點(diǎn)，表明矮化組多態(tài)性高于半