兒童軟骨發(fā)育不全和并多指癥的基因診斷新技術(shù)的研究.pdf

1、目的和意義：
　　 軟骨發(fā)育不全（Achondroplasia，ACH）是常見的因肢體短縮導(dǎo)致的侏儒癥之一，是常染色體顯性遺傳病。研究發(fā)現(xiàn)，成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3（fibroblast growth-factor receptor 3，F(xiàn)GFR3）基因上的少數(shù)幾個(gè)突變位點(diǎn)可以引起先天性軟骨發(fā)育不良，而且98％的突變位于核苷酸1138位（c.1138），即c.1138G>A和 c.1138G>C 。早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷和早期治療或

2、對(duì)患病胎兒進(jìn)行終止妊娠是目前對(duì)該病最常用的臨床干預(yù)措施。本實(shí)驗(yàn)旨在探索和構(gòu)建一種應(yīng)用高分辨率熔解曲線（High-resolution melting，HRM）分析法對(duì)先天性軟骨發(fā)育不全進(jìn)行基因診斷的突變篩查方法。高分辨率熔解曲線（High-resolution melting，HRM）分析法是一種簡(jiǎn)捷和可靠的分子檢測(cè)方法，特別適用于單基因突變疾病。
　　 方法：
　　 在本研究中，我們同時(shí)使用HRM和限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性

3、-多聚酶鏈反應(yīng)（PCR-RFLP）法對(duì)14例軟骨發(fā)育不全的病例進(jìn)行FGFR3基因突變分析并進(jìn)行兩種方法的對(duì)比。
　　 結(jié)果：
　　 檢測(cè)顯示11個(gè)病人攜帶有c.1138 G>A突變，1個(gè)病人攜帶有c.1138 G>C突變，但其中的一個(gè)家系（包括兩個(gè)成員）未發(fā)現(xiàn)突變。兩種方法結(jié)果一致。
　　 結(jié)論：
　　 我們認(rèn)為與PCR-RFLP方法相比，HRM分析法是一項(xiàng)更加簡(jiǎn)捷，可靠和廉價(jià)的檢測(cè)手段，更適合作為先天性

4、軟骨發(fā)育不良病人FGFR3基因常見突變臨床檢測(cè)的方法。本研究率先在國(guó)內(nèi)構(gòu)建了一套應(yīng)用HRM技術(shù)對(duì)先天性軟骨發(fā)育不良致病基因進(jìn)行診斷的新方法。
　　 目的：及意義先天性并多指(趾)(synpolydactyly，SPD)是一種常見的畸形，我國(guó)圍產(chǎn)兒的并多指（趾）畸形的總發(fā)生率為3.09/萬。臨床表現(xiàn)以指(趾)間的膜性融合為主要特征，伴有或不伴有骨性融合。并多指以散發(fā)為主，部分有遺傳性，多為常染色體顯性遺傳。臨床上將并指分為I～V型

5、5種亞型，其中II型并指即SPD，較常見。本文主要研究散發(fā)性SPD與HOXD13基因突變的關(guān)系。對(duì)41例散發(fā)的SPD畸形進(jìn)行HOXD13基因突變分析，并探討散發(fā)SPD與HOXD13基因突變的相關(guān)性。
　　 方法：
　　 本實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象來自2009年1月至2011年3月上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬上海市兒童醫(yī)院骨科確診的41名散發(fā)性并多指畸形患者。抽提基因組DNA，針對(duì)HOXD13基因外顯子設(shè)計(jì)引物，PCR擴(kuò)增后測(cè)序，分析突變位

6、點(diǎn)。
　　 結(jié)果：
　　 在41名患兒中，有兩名患兒分別攜帶有兩種新型的HOXD13基因突變，即c.32 G>C(G11A) 和 c.64 G>T(A22S)。經(jīng)查詢，上述突變?yōu)樾律╠e novo）突變。其余39名患兒均未找到突變基因。
　　 結(jié)論：
　　 研究發(fā)現(xiàn)SPD與位于染色體2q31區(qū)域的HOXDl3基因發(fā)生多聚丙氨酸鏈延伸(polyalanine expansion，PAE)突變密切相關(guān)。近年