IGFBP-6與VDR的相互作用與功能研究.pdf

1、胰島素樣生長因子(Insulin-like Growth Factor,IGF)是人體重要的促生長因子,在胚胎的組織器官形成及發(fā)育和成體的生長過程中發(fā)揮重要的促進(jìn)作用。胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白(IGF-binding Protein,IGFBP)是IGF的結(jié)合蛋白,目前該家族共有六個成員(分別命名為IGFBP-1-IGFBP-6)。IGFBPs家族通過兩條途徑發(fā)揮作用。一方面,IGF依賴性途徑和IGF非依賴性途徑。
　　 胰島素

2、樣生長因子結(jié)合蛋白-6(Insulin-like growth factor binding protein-6,IGFBP-6)是一種分泌型糖蛋白,能夠與胰島素樣生長因子-Ⅱ(Insulin-like growthfactor—Ⅱ,IGF-Ⅱ)特異結(jié)合并在血流中運(yùn)送該因子到各器官、組織,一定程度上抑制著IGF-Ⅱ的生物學(xué)活性,其與IGF-Ⅱ結(jié)合的能力是與IGF-Ⅰ結(jié)合的20-100倍。IGFBP-6分布廣泛,在多種組織中都有分布,多種

3、體液和體外建株的細(xì)胞系中也檢測到了IGFBP-6的存在。目前對IGFBP-6的研究提示,IGFBP-6具有IGF非依賴性的功能,如抑制細(xì)胞的生長、促進(jìn)細(xì)胞凋亡等。但目前對IGFBP-6行使其IGF非依賴性功能的機(jī)制了解較少。
　　 實(shí)驗(yàn)室前期研究已發(fā)現(xiàn),重組表達(dá)的IGFBP-6蛋白能夠進(jìn)入細(xì)胞核。在此基礎(chǔ)上,本課題通過GST pull-down實(shí)驗(yàn)和免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)IGFBP-6能夠與維生素D受體(Vitamin D Rece

4、ptor,VDR)相互作用。并且IGFBP-6能夠結(jié)合于VDR的C端結(jié)構(gòu)域。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),IGFBP-6抑制維甲酸X受體(RetinoidⅩ Receptor,RXR)與VDR異二聚體的形成。細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)觀察,IGFBP-6能夠與VDR共定位于細(xì)胞核,再次驗(yàn)證了兩種蛋白的相互作用。
　　 維生素D3[1,25-dihydroxyvitamin D3,1,25(OH)2D3]是VDR的配體,能夠結(jié)合于VDR并使VDR識別、結(jié)

5、合至染色體上的VitD應(yīng)答元件(VitD ResponsibleElement,VDRE),從而促進(jìn)某些在啟動子區(qū)含有VDRE序列的基因轉(zhuǎn)錄,如骨鈣素(Osteocalcin,Oste)、生長激素(Growth Hormone,GH)、堿性磷酸酶(AlkalinePhospatase,ALP)等。本課題通過雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),IGFBP-6能夠抑制由1,25(OH)2D3引起的骨鈣素和生長激素編碼序列的高水平轉(zhuǎn)錄。另一方面,已知ALP的