苦參堿抑制人惡性黑素瘤A375細(xì)胞株侵襲轉(zhuǎn)移的體外實(shí)驗研究.pdf

1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文苦參堿抑制人惡性黑素瘤A375細(xì)胞株侵襲轉(zhuǎn)移的體外實(shí)驗研究姓名：劉曉艷申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：皮膚病與性病學(xué)指導(dǎo)教師：方紅20060401浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文益引起人們的興趣，有關(guān)實(shí)驗和臨床研究方興未艾。但苦參堿對MM細(xì)胞增殖和凋亡影響的相關(guān)研究罕見報道。本研究以體外培養(yǎng)的人惡性黑素瘤A375細(xì)胞(以下簡稱A375細(xì)胞)為研究對象，觀察苦參堿對MM細(xì)胞增殖和凋亡的影響。方法l、MTT法檢測苦參堿對A375細(xì)胞增殖的作

2、用設(shè)025m咖L、05m∥mL、1Om咖L和2Om咖L苦參堿干預(yù)組，對照組僅加等量的培養(yǎng)液，各濃度復(fù)4孔。每隔2d更換含同樣藥物濃度的新鮮培養(yǎng)液，分別培養(yǎng)16d，加入MTT繼續(xù)孵育4h后，酶標(biāo)儀測570nm吸光度(A)值。實(shí)驗重復(fù)3次疆日胞增殖抑制率=(對照組A值處理組A值)，對照組A值100％。2、流式細(xì)胞儀檢測苦參堿對A375細(xì)胞凋亡的作用設(shè)對照組及0125m∥mL、O25m咖L、O5m∥mL和1Om咖L苦參堿干預(yù)組，各濃度復(fù)3瓶。

3、藥物作用48h后收集細(xì)胞，取100此細(xì)胞懸液于5mL流式管中，加入AIlIlcxinVF11℃和PI各5皿，室溫避光孵育15mjn后在流式細(xì)胞儀上測定。實(shí)驗重復(fù)3次。3、細(xì)胞形態(tài)觀察設(shè)對照組及O25m咖L、05m咖L和1Omg，mL苦參堿干預(yù)組。藥物作用48h后收集細(xì)胞。10％甲醛固定，HE染色，倒置光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。用25％的戊二醛固定2h，固定脫水包埋后，透射電鏡下觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。4、統(tǒng)計學(xué)處理數(shù)據(jù)以i士s表示。應(yīng)用sPs