二氯醋酸二異丙胺對(duì)重癥胰腺炎肝臟損傷的保護(hù)機(jī)制研究.pdf

1、目的:探討DADA(復(fù)方二氯醋酸二異丙胺注射液；肝樂(lè))對(duì)重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis；SAP)大鼠肝臟細(xì)胞凋亡指數(shù)及Bcl-2、細(xì)胞色素C及Fas基因表達(dá)的影響,以及其對(duì)ALT(Aspertate aminotransferase:ALT；谷草轉(zhuǎn)氨酶)、AST(Alanineaminotransferase；AST；谷丙轉(zhuǎn)氨酶)及膽紅素的影響,探討DADA對(duì)重癥胰腺炎肝臟損傷的保護(hù)機(jī)制。
　　

2、 方法:雄性SD大鼠78只,體重250g～300g,隨機(jī)分為正常組(N組),假手術(shù)組,重癥急性胰腺炎模型組(SAP組),肝樂(lè)治療組(DADA組)。胰腺炎組采用5％牛磺膽酸鈉1ml／kg(注射速度0.2ml／min)逆行胰膽管注射方法復(fù)制大鼠重癥急性胰腺炎模型,造模成功以后再隨機(jī)分為SAP組和DADA組,假手術(shù)組開(kāi)腹后翻動(dòng)腸壁即關(guān)腹。術(shù)后禁食,清醒后自由進(jìn)水。DADA組大鼠在模型制備成功后10min開(kāi)始給予肝樂(lè)注射液(0.357mL／k

3、g／12h)尾靜脈注射；SAP組大鼠采用同樣方法給予等量的生理鹽水。于12h、24h、48h、72h時(shí)間點(diǎn)每組分別處死各組大鼠；對(duì)各組大鼠胰腺損傷、肝臟損傷進(jìn)行大體形態(tài)和光鏡下觀察,并行肝臟組織病理評(píng)分；全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定大鼠血清AMY(amylase；血清淀粉酶)、AST、ALT、DBIL(Direct bilirubin；直接膽紅素)、TBIL(Total bilirubin；總膽紅素)、IBIL(Indirect bilirub

4、in；間接膽紅素)；用TUNEL法測(cè)定肝臟細(xì)胞凋亡指數(shù),SABC免疫組化染色法測(cè)定肝臟Bcl-2、Fas、細(xì)胞色素C基因表達(dá)。所有結(jié)果均用SPSS13.0軟件分析,行方差分析。
　　 結(jié)果:1、胰腺組織病理改變:(1)胰腺大體形態(tài)上改變,各時(shí)間點(diǎn)的正常組及假手術(shù)組大鼠胰腺形態(tài)均未見(jiàn)明顯異常。SAP12h組大鼠胰腺顏色紫暗,腹腔內(nèi)有明顯的腹水,但腹水量少,胰腺充血水腫明顯,并且可見(jiàn)局部的胰腺組織出血、壞死；24h組大鼠胰腺呈灰褐色

5、,腹腔內(nèi)可見(jiàn)大量腹水,胰腺與周圍臟器有部分的粘連,并可見(jiàn)粘連處的胰腺組織有片狀的出血、壞死；48h組大鼠胰腺呈明顯的灰褐色,腹腔內(nèi)可見(jiàn)大量的血性腹水,胰腺與周圍臟器有大面積的粘連,粘連處的胰腺組織有廣泛的出血、壞死；72h組大鼠腹腔內(nèi)可見(jiàn)大量的血性惡臭腹水,胰腺組織周圍腸管嚴(yán)重淤脹,胰腺呈明顯的灰褐色,胰腺與周圍臟器有大面積的粘連,并可見(jiàn)粘連處的胰腺組織有大面積的出血、壞死及壞死灶內(nèi)的鈣化灶。DADA組各時(shí)間點(diǎn)大鼠雖然同樣可以見(jiàn)到腹腔內(nèi)

6、不同程度的腹水,胰腺顏色變淡甚至紫暗,胰腺與周圍臟器粘連,粘連處的胰腺組織有出血、不同程度的壞死等結(jié)構(gòu)改變,但程度較SAP組對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)大鼠胰腺組織大體形態(tài)改變明顯減輕。(2)光鏡下胰腺組織結(jié)構(gòu)改變:正常組及假手術(shù)組各時(shí)間點(diǎn)大鼠胰腺組織結(jié)構(gòu)光鏡下結(jié)構(gòu)保持完整,胰腺間質(zhì)內(nèi)無(wú)炎細(xì)胞浸潤(rùn)及其他病理改變。SAP12h組可見(jiàn)胰腺組織的葉間隔、小葉間隔及胰腺腺泡間隔增寬,部分的胰腺小葉結(jié)構(gòu)紊亂,胰腺腺泡細(xì)胞腫脹,胰腺的腺泡間隔內(nèi)可見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn),胰腺組

7、織有灶性出血、壞死；24h組部分正常的胰腺小葉結(jié)構(gòu)消失,胰腺腺泡細(xì)胞嚴(yán)重腫脹,胰腺腺泡間隔內(nèi)可見(jiàn)大量的炎細(xì)胞浸潤(rùn),胰腺組織有片狀出血、壞死；48h組胰腺正常的小葉結(jié)構(gòu)消失,胰腺腺泡細(xì)胞極度腫脹,腺泡間隔內(nèi)可見(jiàn)大量的炎細(xì)胞浸潤(rùn),胰腺組織可見(jiàn)廣泛出血、壞死；72h組胰腺組織正常的小葉結(jié)構(gòu)消失,胰腺腺泡細(xì)胞極度腫脹,胰腺腺泡間隔內(nèi)可見(jiàn)大量的炎細(xì)胞浸潤(rùn),胰腺組織內(nèi)可見(jiàn)廣泛的出血、壞死,壞死區(qū)內(nèi)可見(jiàn)明顯的鈣化灶。DADA組大鼠光鏡下胰腺組織同樣可

8、見(jiàn)胰腺小葉結(jié)構(gòu)紊亂,間質(zhì)內(nèi)炎細(xì)胞浸潤(rùn),胰腺腺泡細(xì)胞腫脹,并可見(jiàn)不同程度的胰腺組織出血、壞死等病理改變,但其程度較SAP組對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的胰腺組織有改變明顯的減輕。2、肝臟組織結(jié)構(gòu)病理改變及肝臟組織病理學(xué)評(píng)分:(1)大體形態(tài)改變,各時(shí)間點(diǎn)N組及假手術(shù)組大鼠肝臟大體形態(tài)均未見(jiàn)明顯的異常。SAP組12h時(shí)見(jiàn)肝臟體積略增大,包膜正常；24h時(shí)見(jiàn)肝臟體積增大,包膜緊張,與胰腺有少許的粘連；48h時(shí)見(jiàn)肝臟體積增大,包膜緊張,顏色稍淡,與胰腺粘連明顯,可

9、見(jiàn)粘連部位肝臟組織壞死；72h時(shí)見(jiàn)肝臟體積明顯增大,包膜緊張,顏色明顯變淡,與胰腺粘連較重,與胰腺粘連部位肝臟組織明顯壞死。DADA組12h時(shí)肝臟大體形態(tài)與SAP組12h時(shí)無(wú)明顯差異；24h時(shí)肝臟體積增大；48h時(shí)肝臟體積增大,包膜略緊張,少數(shù)與胰腺組織粘連,粘連處可見(jiàn)點(diǎn)片狀的肝臟組織壞死。72h時(shí)肝臟體積增大,包膜略緊張,與胰腺組織粘連明顯,粘連處可見(jiàn)明顯的肝臟組織壞死灶,但較SAP組明顯的減輕。(2)光鏡下觀察肝臟組織結(jié)果改變:N組

10、及假手術(shù)組大鼠各時(shí)間點(diǎn)肝臟組織形態(tài)未見(jiàn)明顯的異常。SAP組12h時(shí)肝細(xì)胞輕度水腫,細(xì)胞間隙增寬:24h時(shí)肝細(xì)胞腫脹加重伴炎性細(xì)胞浸潤(rùn)改變,脂肪變少數(shù)有紅細(xì)胞淤積；48h時(shí)可見(jiàn)局灶性或不規(guī)則片狀肝細(xì)胞壞死,肝竇及匯管區(qū)周圍大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及大量紅細(xì)胞；72h時(shí)可見(jiàn)較大面積的局灶性或不規(guī)則片狀肝細(xì)胞壞死,肝竇及匯管區(qū)周圍大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及紅細(xì)胞。DADA各組仍可肝細(xì)胞的腫脹、炎細(xì)胞的浸潤(rùn)及區(qū)域的肝細(xì)胞壞死等改變,但程度較SAP組減輕。(3)

11、組織病理學(xué)評(píng)分:假手術(shù)組、SAP組、DADA組大鼠肝臟組織病理學(xué)評(píng)分12h時(shí)SAP組高于假手術(shù)組(P<0.05),DADA組與SAP組無(wú)明顯差異(P>0.05)；24h、48h、72h時(shí)分別為SAP組高于假手術(shù)組(P<0.05),DADA組低于SAP組(P<0.05)；72h時(shí)達(dá)到高峰。3、AMY、AST、膽紅素于各時(shí)間點(diǎn)假手術(shù)組無(wú)明顯的改變,SAP組、DADA組各時(shí)間點(diǎn)較假手術(shù)組明顯的升高(P<0.05),DADA組低于SAP組(P<

12、0.05)。4、肝臟細(xì)胞凋亡指數(shù)、Fas、細(xì)胞色素C基因表達(dá)各時(shí)間點(diǎn)假手術(shù)組無(wú)明顯的改變(P>0.05),SAP組、DADA組各時(shí)間點(diǎn)較假手術(shù)組明顯的升高(P<0.05),DADA組低于SAP組(P<0.05)。Bcl-2基因表達(dá)各時(shí)間點(diǎn)假手術(shù)組無(wú)明顯的改變,SAP組、DADA組各時(shí)間點(diǎn)較假手術(shù)組明顯的降低(P<0.05),DADA組高于SAP組(P<0.05)。
　　 結(jié)論:1、DADA對(duì)大鼠胰腺肝臟損害具有保護(hù)作用,可能為臨