辛伐他汀干預(yù)CD40-CD40L系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、【目的】通過對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的體外實(shí)驗(yàn)研究,探討(1)辛伐他汀對(duì)細(xì)胞因子介導(dǎo)的CD40表達(dá)的影響;(2)辛伐他汀對(duì)CD40/CD40L系統(tǒng)介導(dǎo)的粘附分子表達(dá)的影響,及對(duì)淋巴細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞粘附作用的影響;(3)CD40/CD40L系統(tǒng)介導(dǎo)的粘附分子表達(dá)的分子機(jī)制;(4)辛伐他汀干預(yù)CD40/CD40L系統(tǒng)的分子機(jī)制.【方法】(1)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株ECV-304培養(yǎng);(2)刺激劑腫瘤壞死因子-α(TNF-α)/干擾素-γ(IFN-γ)加

2、入,=使內(nèi)皮細(xì)胞激活,用不同濃度辛伐他汀干預(yù),流式細(xì)胞儀和逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測CD40的表達(dá);再用甲羥戊酸(3-甲基-3,5-二羥基戊酸,HMG-CoA還原酶反應(yīng)產(chǎn)物)干預(yù)上述過程,相同方法檢測的CD40表達(dá).(3)CD40L干預(yù)內(nèi)皮細(xì)胞,使之與其表面的CD40作用,用不同濃度辛伐他汀干預(yù),流式細(xì)胞儀和RT-PCR檢測干預(yù)前后E選擇素(E-selectin)、血管細(xì)胞粘附分子-1(VCAM-1)、細(xì)胞間粘附分子-1(

3、ICAM-1)的表達(dá);同樣再用甲羥戊酸干預(yù)該過程,相同方法檢測上述粘附分子的表達(dá).(4)流式細(xì)胞儀檢測CD40L介導(dǎo)的淋巴細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的粘附作用,及辛伐他汀對(duì)該作用的影響.(5)陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)法短暫轉(zhuǎn)染核因子-κB(NF-κB)P65正反義寡核苷酸(ODN)至CD40L干預(yù)的內(nèi)皮細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)染正反義寡核苷酸對(duì)CD40L介導(dǎo)的E-selectin、VCAM-1表達(dá)的影響;(6)免疫印跡分析(Western-Blot)及Tra

4、nsAM<'TM>系統(tǒng)檢測CD40L及辛伐他汀干預(yù)前后NF-κB(P65)的量及活性.【結(jié)論】(1)細(xì)胞因子TNF-α+IFN-γ可使內(nèi)皮細(xì)胞CD40表達(dá)明顯增加,辛伐他汀可抑制細(xì)胞因子介導(dǎo)的CD40的表達(dá),并呈一定的劑量依賴性;甲羥戊酸不能抑制辛伐他汀對(duì)細(xì)胞因子介導(dǎo)的CD40表達(dá)的下調(diào)作用,提示辛伐他汀抑制細(xì)胞因子介導(dǎo)的CD40表達(dá)的作用是HMG-CoA還原酶非依賴性的.(2)CD40L可通過與其受體CD40相互作用而參與內(nèi)皮細(xì)胞的激

5、活過程,辛伐他汀可呈劑量依賴性的下調(diào)CD40L介導(dǎo)粘附分子的表達(dá),并降低CD40L介導(dǎo)的淋巴細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的粘附作用;甲羥戊酸抑制了辛伐他汀對(duì)CD40L介導(dǎo)的粘附分子表達(dá)的下調(diào)作用,提示辛伐他汀抑制CD40L介導(dǎo)的粘附分子的表達(dá)是通過抑制HMG-CoA還原酶而發(fā)揮作用的.(3)CD40L干預(yù)的內(nèi)皮細(xì)胞核抽提物中轉(zhuǎn)錄因子NF-κB(P65)的量及活性明顯升高,且NF-κB的激活明顯早于CD40L介導(dǎo)的粘附分子表達(dá)的增加;另外,P65反義O