中國人Brugada綜合征基因突變K317N的功能表達研究.pdf

1、背景：自從1992年Brugada綜合征被作為一個臨床綜合征提出來后，人們對它的認識日漸深入。Brugada綜合征并不是一個罕見的疾病，在某些國家，其在青年人的致死原因中排名第二位，僅次于交通意外。其靜止心電圖特征表現(xiàn)為右胸導聯(lián)的ST段持續(xù)抬高和完全或者不完全的右束支傳導阻滯，而反復發(fā)生多形性室性心動過速、心室顫動則是導致心性猝死的重要原因。在臨床心臟病學研究中，用分子遺傳學的方法來解釋某些心臟結構正常病人心臟猝死的機制正日益受到重視。

2、近十年的研究表明，編碼人類心臟鈉通道α亞單位的SCN5A基因與Brugada綜合征的發(fā)病機制密切相關，其原因可能是SCN5A基因的突變造成了心臟鈉通道蛋白的功能障礙。遺傳性鈉通道的缺陷導致動作電位Ⅰ相末內向離子流的減弱，Ito占優(yōu)，使動作電位平臺期消失，導致右室跨室壁電壓差(外正內負)的形成以及2相復極不均一，形成了右胸前區(qū)導聯(lián)的ST段抬高及2相折返性室性心律失常的電生理基礎。隨著研究的不斷深入，越來越多的SCN5A基因突變被證實與Br

3、ugada綜合征有關，其功能表達研究顯示，SCN5A基因突變對人類心臟鈉通道的影響有以下三種：1.鈉通道未能正常表達，導致細胞上鈉通道數(shù)量的減少。2.電壓和時間依賴的鈉通道電流的激活、失活和再激活的異常，主要表現(xiàn)為失活加速、復活減慢或使其通道處于中間狀態(tài)，導致電流的減少。3.在動作電位的早期，由于鈉通道失活加速導致INa的減少。在先前的研究中，在一個中國人Brugada綜合征家系發(fā)現(xiàn)了SCN5A基因的誤義突變K317N，它位于心臟鈉通道

4、α亞單位SI區(qū)的p-loop區(qū)。而在100個正常對照人群中，沒有發(fā)現(xiàn)類似的基因改變。 目的：為進一步研究Brugada綜合征發(fā)病的離子、細胞電生理機制，擬對首先在中國人Brugada綜合征中發(fā)現(xiàn)的新的SCN5A基因突變(K317N)進行功能表達研究，這就需要正確構建攜帶已知基因突變的表達載體。在第一部分中，對鈉通道基因哺乳動物細胞表達重組體pRc/CMV-hH1應用PCR法進行定點誘變，以構建攜帶有基因突變K317N的pRc/C

5、MV-hH1(K317N)。在第二部分中，運用膜片鉗全細胞記錄技術對成功轉染野生型和突變型SCN5A的293細胞進行電流檢測。 結論：成功構建了攜帶有K317N基因突變的表達重組體pRc/CMV-hH1(K317N)，為進一步進行該突變結構與功能的研究奠定了基礎。大引物誘變法步驟簡單，成功率高，最終通過DNA測序，證明定點誘變過程完全成功。野生型hH1所表達的鈉通道蛋白與正常心肌細胞鈉通道電生理特性相似。而突變型K317N的表達