甲醛誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞ADMA代謝紊亂及其機(jī)制.pdf

1、目的：觀察甲醛對內(nèi)皮細(xì)胞不對稱性二甲基精氨酸(ADMA)代謝的影響，分別從氧化損傷及DNA—蛋白質(zhì)交聯(lián)兩個(gè)方面分析甲醛影響ADMA代謝的特征，研究甲醛對內(nèi)皮細(xì)胞損傷的可能機(jī)制。 方法：利用甲醛與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)建立細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，采用DMEM(低糖)培養(yǎng)基培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株(HUVEC—12)，取生長良好的3～6代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。分為實(shí)驗(yàn)組(分別加入終濃度為6.25，12.5，25，50，100，200，40μmol·L-

2、1的甲醛)和對照組(加入等體積的PBS溶液)，37℃、．5％CO2共同孵育24小時(shí)后，分離細(xì)胞上清液，丙酮酸二硝基苯腙比色法檢測細(xì)胞上清液乳酸脫氫酶(LDH)活力、二硫代二硝基苯甲酸比色法檢測細(xì)胞內(nèi)還原型谷胱甘肽(GSH)含量；黃嘌呤氧化酶法檢測細(xì)胞內(nèi)總超氧化物歧化酶(T—SOD)活力；硫代巴比妥酸法檢測丙二醛(MDA)含量；化學(xué)比色法檢測細(xì)胞內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)；高效液相色譜法檢測細(xì)胞上清液不對稱性二甲基精氨酸(ADMA)含

3、量；高效液相色譜法檢測ADMA代謝差異反映二甲基精氨酸二甲胺水解酶(DDAHⅡ)活性；KCL—SDS沉淀法檢測細(xì)胞內(nèi)DNA—蛋白質(zhì)交聯(lián)。SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，SigmaPlot8.0作圖。 結(jié)果： 1、甲醛對內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，在本研究所用的劑量范圍內(nèi)，表現(xiàn)出兩個(gè)特點(diǎn)：6.25～25.00μmol·L-1甲醛組使細(xì)胞上清液LDH漏出下降，50.00～400.00μmol·L-1甲醛組使細(xì)胞上清液LDH漏出升高，與對

4、照組相比差異均有顯著性(P＜0.05)； 2、甲醛誘導(dǎo)氧化損傷，低劑量(＜12.50μmol·L-1)甲醛對細(xì)胞內(nèi)GSH含量和SOD活力的影響與對照組相比差異沒有顯著性(P＞0.05)；高劑量(＞12.50μmol·L-1)甲醛能明顯降低細(xì)胞內(nèi)GSH含量和SOD活力，與對照組相比差異具有顯著性(P＜0.05)；細(xì)胞上清液MDA的含量隨著甲醛濃度的增加而升高，與對照組相相比差異有顯著性(P＜0.05)； 3、甲醛對ADMA

5、/eNOS的影響，甲醛呈濃度依賴性的誘導(dǎo)細(xì)胞上清液ADMA產(chǎn)生，并抑制細(xì)胞內(nèi)DDAHⅡ活性，與對照組相比差異均有顯著性(P＜0.05)。低劑量(＜12.50μmol·L-1)甲醛顯著提升細(xì)胞內(nèi)eNOS活性，與對照組相比差異有顯著性(P＜0.05)；高劑量(＞12.50μmol·L-1)甲醛呈濃度依賴性顯著降低細(xì)胞內(nèi)eNOS活性(P＜0.05)。 4、甲醛誘導(dǎo)DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)，6.25～12.50μmol·L-1甲醛組誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)