原卟啉鈉提取工藝的改進及其對丙肝病毒的體外抑制研究.pdf

1、目的:本研究對原卟啉鈉的制備方法進行了改進，以期簡化其生產(chǎn)流程。并且體外觀察原卟啉鈉的細胞毒性作用及其HCV亞基因復(fù)制子細胞模型RNA的抑制效果。 方法:將凝固動物血中的蛋白質(zhì)水解，分離出血紅素，經(jīng)原卟啉、原卟啉甲酯等中間產(chǎn)物，最終精制獲得原卟啉鈉。根據(jù)原卟啉鈉的光吸收特性，利用分光光度法對其進行定性和定量檢測。 體外實驗用CCK-8試劑盒篩Napp無細胞毒性濃度區(qū)間。在培養(yǎng)的細胞中依次加入含有藥物的完全培養(yǎng)基(藥物最高

2、濃度：Napp10mg/ml，IFN106IU/ml，各組藥物10倍稀釋，共6個濃度級別，PH7.2)10μ1。藥物作用72小時后用CellCountingKit-8試劑盒在OD450nm測定細胞活力。然后分別取終濃度為lmg/ml、10-1mg/ml、10-2mg/ml、10-3mg/ml、10-4mg/ml的Napp與含HCV亞基因復(fù)制子細胞培養(yǎng)液中共同孵育，同時設(shè)空白對照組和IFN-α2b陽性對照組，3天后用熒光定量PCR法檢測H

3、CV復(fù)制子中RNA的含量。 結(jié)果:提取物為紅褐色結(jié)晶，可溶于水，不溶于氯仿、乙醚及丙酮，易溶于酸性溶液。溶于酸性溶液后純度為93.8％。體外實驗無細胞毒藥物濃度區(qū)間為0～1000μg/ml，在10μg/m1～1000μg/ml區(qū)間內(nèi)對HCV復(fù)制子RNA有明顯抑制作用(P＜0.05～0.01)。 結(jié)論:利用改良后的方法可將非抗凝動物血精制成原卟啉鈉，其純度為93.8％。體外實驗Napp對革巴細胞安全作用范圍較寬，且可有效抑