ARFGAP1參與丙肝病毒復(fù)制的研究.pdf

1、磷脂酰肌醇-4-磷酸(PI4P)是丙型肝炎病毒(HCV)復(fù)制區(qū)域豐度極高的一類磷脂分子，HCV侵染宿主細(xì)胞以后，大量的PI4P富集于HCV復(fù)制的膜網(wǎng)結(jié)構(gòu)上。PI4P水平主要是由PI4P激酶和磷酸酶調(diào)控。磷脂酰肌醇4-激酶PI4K包括PI4KA和PI4KB，PI4K可以磷酸化肌醇分子4-位上的羥基，從而催化磷酸肌醇形成PI4P，目前已有文獻(xiàn)報道HCV的非結(jié)構(gòu)蛋白5A(NS5A)結(jié)構(gòu)域Ⅰ結(jié)合并且激活PI4KA，從而促使HCV復(fù)制區(qū)域產(chǎn)生大量

2、的PI4P;磷酸肌醇脂磷酸酶Sac1能夠消耗細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的PI4P，然而Sac1對于HCV的影響卻很少有人研究。用Sac1特異性的siRNA敲除細(xì)胞內(nèi)的Sac1以后，發(fā)現(xiàn)HCV的復(fù)制水平上升。Sac1和ADP核糖基化因子GTP酶激活蛋白1(ARFGAP1)有相互作用，用ARFGAP1特異性的siRNA或抑制劑處理細(xì)胞以后，HCV的復(fù)制水平顯著降低。并且，發(fā)現(xiàn)NS5A也和ARFGAP1結(jié)合，并且和Sac1都結(jié)合在ARFGAP1的同一區(qū)域，N

3、S5A競爭Sac1在ARFGAP1上的結(jié)合位點，從而促使Sac1的膜定位改變。此外我們還發(fā)現(xiàn)NS5A參與調(diào)控衣被蛋白Ⅰ(COPⅠ)的組裝，阻斷COPⅠ的運輸以后，NS5A將不再產(chǎn)生高水平的的PI4P微環(huán)境。此外，還找到了NS5A(352-355)的四個保守的正電氨基酸對于NS5A和ARFGAP1的結(jié)合至關(guān)重要，將NS5A上這四個正電氨基酸突變掉以后，削弱了NS5A和ARFGAP1的相互作用，同時也削弱了NS5A維持高水平PI4P微環(huán)境的