TAURINE對骨代謝作用的研究.pdf

1、第一部分 成骨細胞表達TAUT，Taurine誘導成骨細胞分化 第一章 成骨細胞表達Taurine轉(zhuǎn)運體 目的：Taurine是細胞內(nèi)含量豐富的一種條件必須氨基酸，有許多重要的生理功能和藥理功能。Taurine主要通過taurine轉(zhuǎn)運體(Taurine Transporter，TAUT)攝入細胞。本研究首次探討taurine轉(zhuǎn)運體在成骨細胞的表達及其攝取[<'3>H]taurine的功能。 方法：應用RT-P

2、CR測定TAUT mRNA在成骨細胞的轉(zhuǎn)錄及其在成骨細胞分化時的表達變化，利用Western blot和免疫細胞化學方法檢測TAUT蛋白在成骨細胞的表達。采用[<'3>H]taurine攝入法評價成骨細胞TAUT的功能。 結(jié)果：原代培養(yǎng)的人成骨細胞、人骨肉瘤成骨細胞系MG63和小鼠成骨細胞系MC3T3-E1均表達TAUT mRNA和蛋白。TAUT mRNA的表達量隨著人成骨樣MG63細胞的分化而逐漸升高。在成骨細胞分化過程中，T

3、AUT的攝取[<'3>]taurine的功能逐漸增強。 結(jié)論：成骨細胞可轉(zhuǎn)錄及翻譯TAUT，并且TAUT mRNA的表達和攝取[<'3>H]taurine的功能在成骨細胞分化過程中逐漸增強。 第二章Taurine通過ERKl／2信號途徑促進成骨細胞分化 目的：Taurine是一種細胞內(nèi)含量豐富的自由氨基酸，有著許多重要的生理作用和藥理功能。我們原來的研究發(fā)現(xiàn)成骨細胞有TAUT的表達，但taurine對成骨細胞的作

4、用機制尚未闡明，本研究探討taurine對成骨樣MG63細胞分化的作用及其信號轉(zhuǎn)導機制。 方法：堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)活性用α-磷酸奈酚法測定，骨鈣素(osteocalcin，OC)用ELISA法檢測，同時研究taurine對成骨細胞基質(zhì)礦化功能的影響。p-ERK，ERK，p-p38，p38，p-JNK,JNK用Western Blot檢測，聯(lián)合ERKl／2信號轉(zhuǎn)導阻斷劑PD98059，p

5、38信號轉(zhuǎn)導阻斷劑SB203580和JNK信號轉(zhuǎn)導阻斷SP600125干預，以探討taurine對成骨細胞分化的信號轉(zhuǎn)導機制。 結(jié)果： (1)Taurine增強成骨樣MG63細胞ALP活性，促進OC的分泌和礦化結(jié)節(jié)的形成。 (2)Taurine誘導成骨細胞ERKI／2磷酸化，而對p38和JNK的激活卻無作用。ERKl／2抑制劑PD98059可阻斷taurine對成骨細胞的促分化作用，說明ERKl／2在taurine促進成骨細

6、胞分化中起關(guān)鍵作用。 結(jié)論：Taurine通過ERKI／2信號轉(zhuǎn)導途徑促進成骨樣MG63細胞的分化。 第二部分 破骨細胞表達TAUT，TauriHe抑制破骨細胞分化 第一章破骨細胞表達Taurine轉(zhuǎn)運體 目的：骨組織中含有豐富的taurine，成骨細胞可表達TAUT，但破骨細胞是否表達TAUT尚未明確。本研究旨在探討TAUT在破骨細胞的表達及其攝取[<'3>H]taurine功能。 方法：利用

7、RANKL誘導RAW264.7細胞形成破骨細胞，采用逆轉(zhuǎn)錄PCR和免疫印跡檢測RANKL誘導形成的破骨細胞TAUT mRNA和蛋白的表達。用免疫熒光細胞化學及免疫組織化學檢測RANKL誘導的破骨細胞和骨巨細胞瘤破骨細胞TAUT蛋白的表達。應用[<'3>H]taurine攝取法評價RANKL誘導的破骨細胞在分化過程中，TAUT功能的變化。 結(jié)果：(1)RANKL誘導RAW264.7細胞形成的破骨細胞，可表達TAUT mRNA和TA

8、UT蛋白,RANKL誘導的破骨細胞和取白骨巨細胞瘤的破骨細胞TAUT免疫組化檢測均陽性。(2)隨著破骨細胞的分化進程，TAUT的表達量逐漸增加，并且其攝取[<'3>H]taurine的功能逐漸增強。 結(jié)論：破骨細胞可表達功能性的TAUT，隨著破骨細胞分化TAUT攝取[<'3>H]taurine的功能逐漸增強。 目的：研究taurine對RANKL誘導的破骨前體細胞RAW264．7形成破骨細胞的影響，并進一步探討tauri

9、ne對破骨細胞骨吸收功能的影響。 方法：應用MTT法測量taurine和／或RANKL對RAW264．7細胞活性的影響?？咕剖崴嵝粤姿崦?TRAP)染色法觀察taurine對TRAP陽性多核破骨細胞形成的影響，用骨吸收陷窩面積計數(shù)法分析破骨細胞的骨吸收功能。 結(jié)果：Taurine對RAW264．7細胞無明顯毒性作用，RANKL明顯抑制RAW264．7細胞的增殖，但taurine和RANKL之間無協(xié)同作用。taurine

10、可抑制RANKL誘導的TRAP陽性多核破骨細胞的形成，并抑制其骨吸收功能。 結(jié)論：Taurlne能直接抑制RANKL誘導的破骨細胞形成及其骨吸 收功能。 第三部分Taurine通過ERKl／2途徑促進成骨細胞結(jié)締組織生長因子的表達 目的：研究taurine對成骨細胞結(jié)締組織生長因子(CTGF)表達的影響，并探討該作用的細胞信號轉(zhuǎn)導通路。 方法：用Real-time PCR檢測taurine對MC3T3

11、-E 1成骨細胞CTGFmRNA表達的影響，用Westem blot檢測taurine對成骨細胞培養(yǎng)上清中CTGF表達的改變。聯(lián)合ERKl／2信號轉(zhuǎn)導阻斷劑PD98059干預，以研究taurine對CTGF作用的信號轉(zhuǎn)導途徑。 結(jié)果：Taurine呈時間和劑量依賴性促進成骨細胞CTGF的表達。Taurine可誘導MC3T3-E1成骨細胞ERKl／2的磷酸化，ERKl／2抑制劑可阻斷taurine促進成骨細胞CTGF表達的作用。