2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:研究TLR4在各類肝細(xì)胞中的表達(dá),探討胰島素對于TLR4的受體調(diào)控作用,發(fā)現(xiàn)肝臟糖代謝疾病的新的分子表征。
  方法:選用正常人肝細(xì)胞QSG-7701、HL-7702、THLE-2和大鼠肝細(xì)胞BRL-3A,以及肝癌細(xì)胞LM3和HepG2細(xì)胞系作為研究對象。
  1、采用PCR和WB法檢測TLR4在各種肝細(xì)胞中分布情況。
  2、采用siRNA/TLR4沉默肝臟正常細(xì)胞中的TLR4,建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。
  

2、3、采用建立好的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株作為研究對象,胰島素和LPS刺激作用后,用PCR和WB法,分別從mRNA和蛋白水平檢測TLR4和能量代謝基因PFKFB3的表達(dá)情況。
  4、采用體外劃痕愈合實(shí)驗(yàn)觀察TLR4對肝細(xì)胞遷移能力的影響,transwell小室侵襲試驗(yàn)觀察TLR4對肝細(xì)胞侵襲能力的影響。
  5、采用流式細(xì)胞術(shù)觀察TLR4對肝細(xì)胞周期的影響,磷脂酰絲氨酸外翻法(AnnexinⅤ和PI雙染法)檢測TLR4對肝細(xì)胞凋亡的影

3、響。采用JC-1檢測試劑盒檢測細(xì)胞線粒體跨膜電位。
  6、采用ATP含量檢測試劑盒等,檢測TLR4對肝細(xì)胞中ATP能量代謝指標(biāo)變化的影響。
  7、采用PCR法檢測TLR4在臨床標(biāo)本中表達(dá)情況
  結(jié)果:1、TLR4,這個(gè)炎性因子在正常肝細(xì)胞內(nèi)的表達(dá),高于肝臟腫瘤細(xì)胞。PFKFB3,這個(gè)能量代謝相關(guān)基因,在正常肝細(xì)胞內(nèi)的分布低于肝臟腫瘤細(xì)胞
  2、siRNA TLR4作用后,肝細(xì)胞株內(nèi)TLR4被沉默,同時(shí),P

4、FKFB3基因表達(dá)也會(huì)下調(diào)了。胰島素刺激作用后,正常肝細(xì)胞內(nèi)的TLR4表達(dá)上升,PFKFB3的表達(dá)也有增強(qiáng)。胰島素作用于TLR4被沉默的肝細(xì)胞,TLR4表達(dá)稍有上升,PFKFB3的表達(dá)也略微有上升,但是仍然低于正常水平。
  3、TLR4被沉默的肝細(xì)胞,生長能力下降,胰島素作用后有所提高。
  4、TLR4被沉默的肝細(xì)胞,G0期細(xì)胞數(shù)量上升,胰島素作用后有所下降。
  5、TLR4被沉默的肝細(xì)胞,凋亡細(xì)胞數(shù)量上升,胰島

5、素作用后有所下降。
  6、TLR4被沉默的肝細(xì)胞,線粒體膜電位明顯下降,胰島素作用后有所上升。
  7、中國漢族人群未發(fā)現(xiàn)有雜合子或299Gly、399Ile純合子的存在TLR4多態(tài)性
  結(jié)論:1、TLR4受體在正常肝細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)高于肝腫瘤細(xì)胞,而能量代謝相關(guān)基因PFKFB3,在肝腫瘤細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)高于正常肝細(xì)胞。
  2、TLR4參與肝細(xì)胞的糖代謝,有可能與調(diào)控PFKFB3基因相關(guān),胰島素是TLR4調(diào)控的刺激

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