啟動子的反式激活導致fascin在食管癌中過表達.pdf

1、目的：Fascin在食管癌(ESCC)等腫瘤中過表達，直接參與了癌細胞的分裂增殖和侵襲轉移，與患者不良預后密切相關。但其過表達調(diào)控機制尚不清楚。本研究的目的是檢測該基因啟動子的甲基化情況，探討ESCC中fascin基因的調(diào)控模式。
　　 方法：采用MSP(-56/+114)和BGS技術(-218/+55)對食管癌細胞系和組織樣本進行啟動子區(qū)甲基化檢測；從EC109細胞擴增fascin 基因的+168/+2838 片段(包括第一外

2、顯子和部分第一內(nèi)含子)，分別克隆到含有fascin基因核心啟動子和SV40 啟動子的表達載體下游，并聯(lián)合采用漸進式截短策略和雙熒光素酶檢測系統(tǒng)確認該區(qū)域對啟動子的調(diào)控活性；然后用BGS方法分別檢測食管癌細胞系和癌組織樣本中該區(qū)域(+237/+513 和+560/+859)甲基化情況；為了確認該區(qū)域活性是否由甲基化位點引起，采用甲基化抑制劑5-aza-2’-deoxycytidine處理轉染細胞，通過雙熒光素酶檢測系統(tǒng)對其活性變化進行分析

3、。
　　 結果：運用MSP技術和BGS技術檢測fascin 啟動子區(qū)甲基化情況發(fā)現(xiàn)，無論是細胞系或者臨床樣本該啟動子區(qū)均以非甲基化形式存在。雙熒光素酶分析結果證明，+168/+2838 區(qū)域對fascin 的啟動子區(qū)有抑制作用。進一步分析發(fā)現(xiàn)，發(fā)揮抑制作用的主要為+262/+2838 片段；該區(qū)段的BGS檢測顯示，在EC109、EC18、SHEE 3個細胞系和5對臨床樣本中+560/+859(位于第一外顯子區(qū))區(qū)中41 CpG島