花翅搖蚊乙酰膽堿酯酶的生化特性及其在水質(zhì)監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用.pdf

1、本文以花翅搖蚊Chironomus kiinensis (Tokunaga)為研究對(duì)象，系統(tǒng)研究了搖蚊乙酰膽堿酯酶(AChE)的生物化學(xué)特性及其在活體或離體條件下對(duì)不同種類抑制劑的敏感度，并對(duì)其進(jìn)行了初步純化；此外，還結(jié)合谷胱甘肽．硫．轉(zhuǎn)移酶(GSTs)對(duì)昆明湖不同采樣點(diǎn)一年內(nèi)水質(zhì)的變化進(jìn)行了監(jiān)測(cè)。研究結(jié)果如下： 1 用正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)方法研究了搖蚊AChE酶濃度、底物(ATCh)濃度、反應(yīng)體系的pH、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時(shí)間5個(gè)因素對(duì)搖

2、蚊AChE活性的影響。結(jié)果表明，除酶濃度對(duì)反應(yīng)影響極顯著外(P<0.01)，其它四個(gè)因素對(duì)反應(yīng)也有顯著影響(P<0.05)，因此在進(jìn)行搖蚊AChE活性測(cè)定時(shí)需要加以控制。通過對(duì)不同組合的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行極差分析、方差分析及多重比較得到了搖蚊AChE活性測(cè)定的最適條件：酶濃度為5頭/mL；底物濃度為6mmol/L；pH為8.0；溫度為35℃；時(shí)間為10min。 2 比較了搖蚊AChE對(duì)四種底物的特異性，結(jié)果表明搖蚊AChE對(duì)四種底物的

3、水解趨勢(shì)類似，對(duì)ATCh的水解活性最高，對(duì)。BuTCh的水解活性最低，說明搖蚊體內(nèi)的膽堿酯酶主要是乙酰膽堿酯酶。對(duì)四種底物的水解順序?yàn)锳TCh>β-MTCh>PrTCh>BuTCh。 3 四類殺蟲劑對(duì)搖蚊幼蟲的毒力以及時(shí)間-抑制效應(yīng)、劑量-抑制效應(yīng)試驗(yàn)，都反應(yīng)了搖蚊幼蟲對(duì)不同抑制劑的敏感度。結(jié)果表明，搖蚊幼蟲對(duì)有機(jī)氯類農(nóng)藥最為敏感，其次是有機(jī)磷、擬除蟲菊酯以及氨基甲酸酯類?；铙w條件下，除暴露于擬除蟲菊酯和有機(jī)氯類抑制劑外，ACh

4、E活性都隨著有機(jī)磷和氨基甲酸酯類藥劑濃度的升高或抑制時(shí)間的延長(zhǎng)，其活性逐漸降低。 4 離體條件下，抑制中濃度、抑制時(shí)間進(jìn)程曲線以及抑制動(dòng)力學(xué)常數(shù)都反應(yīng)出搖蚊AChE對(duì)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類抑制劑的敏感性：對(duì)氨基甲酸酯類藥劑的敏感性高于有機(jī)磷類，對(duì)克百威最為敏感，其IC<,50>值為1×10<'-8>mol/L。搖蚊AChE被氨基甲酸酯類抑制后可出現(xiàn)活性抑制恢復(fù)現(xiàn)象即去氨基甲?；?，克百威的解氨基甲?；俾首羁?；而其被有機(jī)磷類藥劑抑制

5、后，在解毒劑不存在的情況下則很難出現(xiàn)活性抑制恢復(fù)現(xiàn)象。 5 用普魯卡因胺親和層析柱對(duì)搖蚊AChE進(jìn)行純化，得到2783倍的純化效率。通過對(duì)純化酶和粗酶生物化學(xué)性質(zhì)的比較，發(fā)現(xiàn)純化酶存在底物過量抑制現(xiàn)象，且最高活性所需的底物濃度低于粗酶，為4mmol/L；純化酶和粗酶對(duì)不同抑制劑的敏感度趨勢(shì)差不多，但其IC<,50>值要低于粗酶。 6 利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定了昆明湖不同采樣點(diǎn)水體中有機(jī)污染物的組分和含量，樣點(diǎn)2作為游