外傷性角膜散光防治的基礎和臨床研究.pdf

1、鄭州大學博士學位論文外傷性角膜散光防治的基礎和臨床研究姓名：鄭廣瑛申請學位級別：博士專業(yè)：眼科學指導教師：張金嵩20070508鄭州大學2007年博士研究生論文外傷性角麟散光的基礎和臨床研究antisenseoligonueleotide，TGF一＆ASON)轉染角膜外傷縫合術后的瘢痕組織，然后通過裂隙燈觀察、HE染色、免疫組化和熒光定量PCR等檢測方法，從大體形態(tài)、組織結構、蛋白數量及基因水平等不同層面觀察分析T6F一82反義寡核苷酸

2、對TGFB2的活性的影響，為實現藥物干預減少瘢痕形成以控制外傷性角膜散光的設想提供理論依據。方法1TGF—B2反義寡核苷酸(anti—senseoligodeoxynueleofide，ASON)的制備；根據兔TGFD2mRNA序列(Genebank號AY429466)，由上海生工生物技術有限公司合成一段2lb的ASON，其序列為5‘一AGAAGTTGGCATTATACCCTT3’，并合成一段錯義寡核苷酸(missenseoligode

3、oxynucleotide，MSON)作為對照。2選用清潔級健康無眼病的新西蘭大向兔24只，雌雄兼用，月齡為3個月。隨機分組：實驗組16只，雙眼均制各角膜穿孔傷縫合術后模型。左眼術后滴TGFp2ASON，為TGFp2ASON組；右眼滴生理鹽水，為生理鹽水組；對照組8只，不傲手術，同樣左眼滴TGFB2ASON，右眼滴生理鹽水。兩組分別于手術后4、7、14、28天取角膜標本，每次6只，實驗組4只，對照組2只。3觀察指標：應用裂隙燈觀察角膜瘢

4、痕組織的形態(tài)變化；HE染色觀察角膜基質細胞，即成纖維細胞的激活、增生、分化情況；免疫組織化學法(SP法)檢測Ⅱ一SMA及纖維連接蛋白(FN)的染色情況；應用實時熒光定量PCR觀察TGF一132的mRNA表達情況，評價TGF，&反義寡核苷酸對角膜創(chuàng)傷修復過程的影響及毒副作用。結果1裂隙燈觀察TGF陡ASON組：球結膜輕度充血，角膜縫線附近水腫，前房閃輝(O～)，虹膜紋理清晰，瞳孔圓居中，眼壓正常。隨著時問的延長，眼前段炎癥反應逐漸減輕，至