解酮障礙SCOT基因突變與臨床研究.pdf

1、背景：酮體是能量從肝臟向肝外組織轉(zhuǎn)移的主要載體[1]，主要在肝臟生成。體內(nèi)酮體濃度增加時即發(fā)生酮癥酸中毒。琥珀酰輔酶A轉(zhuǎn)硫酶（SCOT）是酮體能量代謝的關(guān)鍵酶，位于多個組織的線粒體內(nèi)，其作用是將琥珀酰輔酶A的輔酶A基團轉(zhuǎn)移至乙酰乙酸從而催化乙酰乙酰輔酶A的形成，這一步驟是酮體利用的第一步，隨后乙酰乙酰輔酶A進(jìn)一步斷裂成兩分子的乙酰輔酶A進(jìn)入三羧酸循環(huán)。研究表明：SCOT催化乙酰乙酰輔酶A生成的具體機制是與輔酶A的巰基生成硫酯并以非共價鍵

2、的形式連接輔酶A的ADP基團。硫酯形成的部位位于SCOT肽鏈第344位谷氨酸的羧基上。SCOT缺乏導(dǎo)致發(fā)作性的酮癥酸中毒，為常染色體隱形遺傳，大多數(shù)情況下作為兒童酮癥酸中毒鑒別診斷的一部分。與大多數(shù)有機酸血癥不同的是，除乙酰乙酸和3-羥基丁酸等酮體增加外，這類病人的血和（或）尿液中無其他診斷性的代謝產(chǎn)物出現(xiàn)。自1972年J.T.Tildon等報道的第一例SCOT缺陷病人至今，只發(fā)現(xiàn)18例先證者[1-12]]和10種突變類型[3,5,6,

3、8-12]。
　　 目的：探討解酮障礙SCOT基因突變類型以及解酮障礙患者基因型和臨床表型之間的關(guān)系。
　　 方法：提取3例臨床高度SCOT基因缺陷所致解酮障礙患兒以及50例正常對照兒童外周血總RNA，進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)，擴增整個 SCOT cDNA編碼區(qū)片段并克隆測序，對RNA檢測異常的患兒進(jìn)行DNA檢測；觀察基因突變患兒的臨床表現(xiàn)。
　　 結(jié)果 3例患者中，1例發(fā)現(xiàn)12外顯子的跳躍現(xiàn)象，DNA水平檢測發(fā)現(xiàn)1

4、2外顯子第48位堿基發(fā)生替代（c1147G>A）。mRNA前體二級結(jié)構(gòu)分析顯示12外顯子的這種替代確實改變了正常序列的mRNA前體二級結(jié)構(gòu)，ESE分析提示堿基替代位點所在的這段嘌呤富集區(qū)作為ESE的可能性并不大。其余2例未發(fā)現(xiàn)突變。SCOT基因12外顯子跳躍的患兒表現(xiàn)為感染誘發(fā)的反復(fù)發(fā)作的嚴(yán)重酮癥酸中毒，經(jīng)積極搶救癥狀能緩解，發(fā)作間歇期患兒同正常兒童，生長發(fā)育正常。
　　 結(jié)論：SCOT基因12外顯子48位堿基的替代是否通過改變