柯薩奇病毒B3對Hela細(xì)胞Mtor-p70S6K表達(dá)的調(diào)控作用.pdf

1、目的：通過檢測柯薩奇病毒B3(Coxsackie virus B3，CVB3)感染“非饑餓法”與“饑餓法”人宮頸癌細(xì)胞株(Henrietta Lacks strain ofcancer cells，Hela)后不同時間點的細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathic effect，CPE)及細(xì)胞內(nèi)CVB3外殼蛋白、哺乳類雷帕霉素靶蛋白(mammaliantarget of rapamycin，mTOR)、核糖體蛋白S6激酶(ribosomal p

2、roteinS6 kinase，p70S6K)mRNA水平，探討細(xì)胞周期的不同時相對mTOR信號通路的影響及CVB3對Hela細(xì)胞mTOR/p70S6K mRNA表達(dá)的調(diào)控作用。
　　 方法：實驗分病毒組和對照組。病毒組以CVB3分別感染“非饑餓法”與“饑餓法”Hela細(xì)胞3h、6h、9h、12h、24h；對照組以病毒維持液培養(yǎng)。通過相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，用RT-PCR、Real-Time PCR檢測Hela細(xì)胞內(nèi)不同時

3、間點的CVB3外殼蛋白、mTOR、p70S6K mRNA表達(dá)，應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果：⑴CVB3感染不同方法培養(yǎng)的HeLa細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)改變：“非饑餓法”和“饑餓法”病毒組感染6 h時，即可見細(xì)胞病變；隨著感染時間的延長，病變效應(yīng)越明顯。⑵RT-PCR檢測Hela細(xì)胞CVB3外殼蛋白mRNA表達(dá)：“非饑餓法”與“饑餓法”的病毒組均隨感染時間的延長，CVB3外

4、殼蛋白mRNA表達(dá)逐漸增加(P<0.05)；各時間點“非饑餓法”與“饑餓法”比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。⑶RT-PCR和Real-Time PCR檢測mTOR、P70S6K mRNA表達(dá)：RT-PCR和Real-Time PCR結(jié)果均顯示，“非饑餓法”mTOR、P70S6KmRNA表達(dá)在病毒組感染12h時明顯下調(diào)，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<05)；感染3h、6h、9h時間點與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.0

5、5)；而“饑餓法”病毒組mTOR、P70S6K mRNA表達(dá)均低于對照組各對應(yīng)時間點，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(all P<0.05)；兩種方法培養(yǎng)的Hela細(xì)胞在感染24h時RT-PCR未檢測到mTOR、P70S6K mRNA表達(dá)，而Real-Time PCR檢測到極低的表達(dá)。⑷“非饑餓法”與“饑餓法”的Hela細(xì)胞mTOR、P70S6K mRNA表達(dá)的比較：RT-PCR和Real-Time PCR結(jié)果均顯示，病毒組和對照組Hela細(xì)胞在各時

6、間點mTOR mRNA表達(dá)“饑餓法”均高于“非饑餓法”，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(all P<0.05)；p70S6K mRNA表達(dá)“饑餓法”均高于“非饑餓法”，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　 結(jié)論：①“非饑餓法”和“饑餓法”病毒組mTOR、p70S6K mRNA表達(dá)均低于對照組，提示CVB3可誘導(dǎo)Hela細(xì)胞mTOR、p70S6K mRNA表達(dá)下調(diào)。②CVB3感染12h、24h時，CVB3外殼蛋白mRNA的表達(dá)明顯增加，而

7、mTOR、P70S6K mRNA表達(dá)明顯下調(diào)，且CVB3感染24h時，CVB3外殼蛋白mRNA高表達(dá)，但無mTOR、p70S6K mRNA表達(dá)或表達(dá)極低，提示mTOR信號通路可能參與了CVB3誘導(dǎo)的Hela細(xì)胞凋亡。③CVB3感染“非饑餓法”Hela細(xì)胞，病毒組僅在12h、24hmTOR、p70S6K mRNA表達(dá)與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義；而“饑餓法”病毒組各時間點與對照組比較均有統(tǒng)計學(xué)意義；“饑餓法”病毒組和對照組Hela細(xì)胞mT