活性維生素D3對(duì)人腎小球系膜細(xì)胞中mTOR-p70s6K表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　探討mTOR/p70s6K信號(hào)通路在人腎小球系膜細(xì)胞中的表達(dá)；闡明活性維生素D3在腎小球系膜細(xì)胞中對(duì)mTOR/p70s6K信號(hào)通路的調(diào)控作用，為臨床上使用活性維生素D3治療慢性腎臟病提供堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。
　　方法:
　　體外培養(yǎng)人腎小球系膜細(xì)胞，取傳代培養(yǎng)至3-7代細(xì)胞分為4組：正常對(duì)照組（加含5％胎牛血清DMEM培養(yǎng)基），VD3組（加10-8mol/L1,25(OH)2D3），雷帕霉素組（加5μg/mL雷

2、帕霉素）,VD3+雷帕霉素組（加10-8mol/L1,25(OH)2D3及5μg/mL雷帕霉素），干預(yù)48小時(shí)。倒置相差顯微鏡下觀察人腎小球系膜細(xì)胞形態(tài)變化及生長(zhǎng)狀況，免疫熒光法檢測(cè)各組系膜細(xì)胞中mTOR、p70s6K蛋白的表達(dá)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR法（RQ-PCR）檢測(cè)各組系膜細(xì)胞中mTOR mRNA、p70s6K mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　(1)各組系膜細(xì)胞生長(zhǎng)及形態(tài)變化：正常對(duì)照組系膜細(xì)胞胞體呈長(zhǎng)梭形、不規(guī)則星形

3、或樹枝狀，胞核居中，圓形或卵圓形，較清晰；VD3及雷帕霉素組，與正常對(duì)照組比較，細(xì)胞數(shù)目有所減少，細(xì)胞之間的鏈接減少，少數(shù)細(xì)胞胞膜皺縮，細(xì)胞體積較對(duì)照組變小，細(xì)胞核濃縮，部分胞漿濃縮甚至出現(xiàn)空泡，部分細(xì)胞漂??；VD3+雷帕霉素組，與VD3及雷帕霉素組相比，細(xì)胞核數(shù)目明顯減少，胞體長(zhǎng)梭形突出或消失。
　　(2)免疫熒光檢測(cè)各組干預(yù)48h后人腎小球系膜細(xì)胞中mTOR、p70s6K蛋白的表達(dá)，與正常對(duì)照組比較，VD3組、雷帕霉素組、VD

4、3+雷帕霉素組系膜細(xì)胞中mTOR、p70s6K蛋白表達(dá)強(qiáng)度均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與VD3組比較，雷帕霉素組系膜細(xì)胞中mTOR、p70s6K蛋白表達(dá)強(qiáng)度無明顯降低，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；與VD3、雷帕霉素組比較，VD3+雷帕霉素組系膜細(xì)胞中mTOR、p70s6K蛋白表達(dá)強(qiáng)度均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　(3)RQ-PCR檢測(cè)各組干預(yù)48h后腎小球系膜細(xì)胞中mTOR mRNA、p70s

5、6K mRNA的表達(dá)：與正常對(duì)照組相比，VD3組、雷帕霉素組、VD3+雷帕霉素組系膜細(xì)胞中mTOR mRNA的表達(dá)顯著降低，p70s6K mRNA表達(dá)顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與VD3組比較，雷帕霉素組系膜細(xì)胞中mTOR mRNA、p70s6K mRNA表達(dá)無明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；與VD3、雷帕霉素組相比，VD3+雷帕霉素組系膜細(xì)胞中 mTOR mRNA的表達(dá)顯著降低，p70s6K mRNA表達(dá)顯

6、著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　(1)1,25(OH)2D3可顯著抑制人腎小球系膜細(xì)胞的增殖；
　　(2)mTOR/p70s6K信號(hào)通路存在于在人系膜細(xì)胞中，1,25(OH)2D3能通過阻滯該通路抑制系膜細(xì)胞增殖；
　　(3)1,25(OH)2D3可協(xié)同雷帕霉素抑制mTOR/p70s6K信號(hào)通路，加強(qiáng)抑制系膜細(xì)胞增殖；
　　(4)1,25(OH)2D3很可能是通過調(diào)控系膜細(xì)胞中相