COP9信號亞基5在日本囊對蝦中的抗病毒功能研究.pdf

1、類泛素化(Neddylation)是一個蛋白翻譯后進(jìn)行修飾的可逆的過程。NEDD8（neural precursor cell expressed，developmentally down-regulated8，神經(jīng)前體細(xì)胞表達(dá)發(fā)育下調(diào)蛋白-8），可以與靶蛋白上賴氨酸殘基相互結(jié)合，發(fā)生Neddylation。Neddylation修飾也是通過E1激活酶、E2結(jié)合酶和E3連接酶的參與，對蛋白進(jìn)行類泛素化修飾，從而促進(jìn)蛋白的降解或調(diào)控靶蛋白

2、的功能。去類泛素化(Deneddylation)和類泛素化為互逆的反應(yīng)。Deneddylation是由COP9信號復(fù)合體（Constitutive photomorphogenesis9 signalosome，CSN）介導(dǎo)來完成的。CSN由八個亞基構(gòu)成。CSN5，其中的第五個亞基，具有不同于其他七個亞基的明顯特點(diǎn)。CSN5具有催化活性位點(diǎn)和鋅離子結(jié)合位點(diǎn)，CSN5在CSN發(fā)揮其功能的過程中占據(jù)關(guān)鍵位置。然而，其在抗病毒免疫中的作用尚不

3、清楚。
　　在本論文中，我們分別對日本囊對蝦體內(nèi)的CS7個亞基(CSN1-CSN2和CSN4-CSNS)進(jìn)行了鑒定和克隆。我們分析了CSN的每個亞基在日本囊對蝦中的組織分布和WSSV刺激的表達(dá)模式。結(jié)果顯示，MjCSN1-2和MjCSN4-6在對蝦的組織中是組成型的分布。MjCSN7和MjCSN8，在對蝦的組織也都是表達(dá)的，除去肝胰腺組織。WSSV對對蝦進(jìn)行刺激時，MjCSN1，MjCSN2，MjCSN4和MjCSN7，MjCSN

4、8的表達(dá)水平明顯的降低，而MjCSN5的表達(dá)水平是呈現(xiàn)上升的趨勢。通過表達(dá)模式分析，CSN5與其他亞基的表達(dá)情況有明顯不同的。所以，我們選擇了對蝦體內(nèi)的CSN5亞基（命名為MjCSN5）作為下一步研究的重點(diǎn)。我們在大腸桿菌中進(jìn)行了對MjCSN5重組蛋白的表達(dá)?？贵w就是使用了該重組蛋白。為了研究MjCSN5的功能，設(shè)計(jì)進(jìn)行了RNA干擾和過表達(dá)實(shí)驗(yàn)。MjCSN5能夠成功的敲除降低后，WSSV在對蝦內(nèi)的復(fù)制水平是上升的。過表達(dá)MjCSN5與穿