日本囊對(duì)蝦中TLRs-TRAF6-ECSIT泛素化-DORSAL-IE1信號(hào)途徑鑒定及其功能研究.pdf

1、研究背景：
　　先天免疫是動(dòng)物啟動(dòng)適應(yīng)性免疫應(yīng)答的基礎(chǔ)，由于無脊椎動(dòng)物僅具有先天免疫系統(tǒng)，所以最初關(guān)于動(dòng)物先天免疫機(jī)理的研究主要在無脊椎動(dòng)物中進(jìn)行，并且經(jīng)過長期的努力獲得了飛躍性的進(jìn)展。在先天免疫調(diào)控過程中，對(duì)病原分子的識(shí)別是宿主非常重要的第一道防線。Toll樣受體(Toll-like receptor，TLR)是細(xì)胞上存在的一種普遍而且重要的先天免疫相關(guān)的模式識(shí)別受體。哺乳動(dòng)物的不同TLR受體可以識(shí)別不同病原表面的病原相關(guān)分子模

2、式(pathogenassociated molecular pattems，PAMPs)。宿主識(shí)別不同的PAMPs后，引發(fā)下游不同的信號(hào)傳遞，進(jìn)而引起下游的核轉(zhuǎn)錄因子激活與免疫效應(yīng)因子如促炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)。在無脊椎動(dòng)物中，果蠅的Toll信號(hào)途徑最早被發(fā)現(xiàn)并報(bào)道，但與脊椎動(dòng)物的TLR信號(hào)途徑相比，對(duì)其信號(hào)識(shí)別和傳遞過程，還有許多未知的地方。自1992年以來，以對(duì)蝦為代表的無脊椎動(dòng)物海產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展迅速但病害頻發(fā)，尤其是白斑綜合征病毒(W

3、SSV)，其對(duì)對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失。鑒于此，多國科研人員紛紛開展對(duì)蝦抗病毒免疫機(jī)理的研究。近年來，對(duì)蝦免疫系統(tǒng)的多種相關(guān)信號(hào)蛋白分子的功能已經(jīng)被逐漸揭示出來，但是大部分研究還是針對(duì)單基因功能與表達(dá)水平的研究，沒有形成對(duì)蝦中免疫信號(hào)傳遞過程的系統(tǒng)認(rèn)識(shí)。例如，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)對(duì)蝦中存在多種TLR受體可能參與病原感染，但是這些受體是否在病毒感染中發(fā)揮作用，其引發(fā)的下游信號(hào)傳導(dǎo)過程如何都還有待研究。
　　科學(xué)問題及意義：
　　本

4、論文中，我們將根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求運(yùn)用多種生物化學(xué)與分子生物學(xué)手段，鑒定出對(duì)蝦中參與識(shí)別病毒感染的重要MjTLR受體，并揭示病毒感染所引發(fā)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中重要的功能蛋白以及這些蛋白發(fā)揮作用的分子機(jī)理。為了解對(duì)蝦中病毒感染相關(guān)信號(hào)途徑的轉(zhuǎn)導(dǎo)和控制對(duì)蝦病毒病以及提高對(duì)蝦的先天免疫提供幫助。
　　結(jié)果及創(chuàng)新點(diǎn)總結(jié)：
　　研究結(jié)果表明日本囊對(duì)蝦中存在一條TLR3-TRAF6/Ecsit泛素化-Dorsal-ie1促進(jìn)病毒復(fù)制信號(hào)途徑。MjT

5、LR3識(shí)別病毒感染感染后，促進(jìn)日本囊對(duì)蝦中MjTRAF6的上調(diào)表達(dá)、泛素化增加和與MjEcsit的相互作用的增加。MjTRAF6通過RING結(jié)構(gòu)域與MATH結(jié)構(gòu)域與MjEcsit相互作用，而其TRAF結(jié)構(gòu)域不與MjEcsit相互作用;病毒感染促進(jìn)MjTRAF6的泛素化進(jìn)而介導(dǎo)MjEcsit的泛素化，泛素化的MjEcsit與MjDorsal相互作用增加，且入核增加，在核內(nèi)泛素化的MjEcsit通過蛋白酶體依賴的途徑被降解，釋放MjDors

6、al與病毒ie1啟動(dòng)子結(jié)合促進(jìn)ie1基因的轉(zhuǎn)錄并促進(jìn)病毒的復(fù)制，降低對(duì)蝦存活率。MjTLR1則通過引發(fā)相反的信號(hào)傳遞過程抑制這一信號(hào)傳遞，進(jìn)而抑制病毒的復(fù)制，提升對(duì)蝦的存活率。而MjTLR2的功能則不明顯。
　　研究的創(chuàng)新點(diǎn):
　　1、闡明了對(duì)蝦中三種MjTLRs在WSSV感染中的不同作用，MjTLR1和MjTLR3分別啟動(dòng)抑制和促進(jìn)病毒復(fù)制的信號(hào)途徑;MjTLR2則作用不明顯;
　　2、闡明了在日本囊對(duì)蝦中，功能蛋白