共相關(guān)蛋白ANXA7-Cal-3-SRI在小鼠肝癌細(xì)胞中的表達(dá)及對(duì)細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、第一部分ANXA7/Gal-3/SRI在小鼠肝癌細(xì)胞株中的共相關(guān)表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)定位及與體外增殖、遷移和侵襲能力的關(guān)系
　　目的:為了深入揭示肝癌淋巴道轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，研究膜聯(lián)蛋白A7(annexin A7，ANXA7)及其共相關(guān)蛋白半乳糖凝集素3（galectin-3，Gal-3）、抗藥蛋白(sorcin，SRI)在小鼠肝癌高、低淋巴道轉(zhuǎn)移潛能Hca-F/Hca-P細(xì)胞中的表達(dá)差異、細(xì)胞內(nèi)定位及對(duì)小鼠肝癌細(xì)胞體外增殖、遷移和侵襲能力

2、的影響。
　　方法:采用qRT-PCR技術(shù)，檢測(cè)ANXA7/Gal-3/SRI在Hca-F/Hca-P細(xì)胞中基因水平的表達(dá);采用Western blot技術(shù)，檢測(cè)ANXA7/Gal-3/SRI在Hca-F/Hca-P細(xì)胞株中蛋白水平的表達(dá);采用CCK-8方法，檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的增殖能力;Transwell小室檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力;采用免疫熒光方法，檢測(cè)蛋白在細(xì)胞內(nèi)的定位情況。
　　結(jié)果:ANXA7在Hca-F細(xì)胞中的基因

3、水平和蛋白水平表達(dá)分別為Hca-P細(xì)胞的3.13倍和1.31倍;半乳糖凝集素3在Hca-F細(xì)胞中的基因水平和蛋白水平表達(dá)分別為Hca-P細(xì)胞的1.56倍和1.35倍;SRI在Hca-F細(xì)胞中的基因水平和蛋白水平表達(dá)分別為Hca-P細(xì)胞的1.5倍和1.8倍。ANXA7有51KD和47KD兩個(gè)亞型，47KD表達(dá)高于51KD∶OD值之比約為45±5比174±12。Hca-F細(xì)胞在體外的增殖、遷徙、侵襲能力均高于Hca-P細(xì)胞。免疫熒光結(jié)果表明

4、，ANXA7及其共相關(guān)蛋白Gal-3、SRI都主要在細(xì)胞漿表達(dá)。
　　結(jié)論:ANXA7及其共相關(guān)蛋白Gal-3、SRI在基因及蛋白水平的表達(dá)高低情況與細(xì)胞體外增殖、遷徙、侵襲能力正相關(guān)，它們可能在小鼠肝癌體外增殖、遷徙侵襲及腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移中共同發(fā)揮重要作用，這為進(jìn)一步探討其作用機(jī)制和功能奠定了基礎(chǔ)。
　　第二部分ANXA7下調(diào)對(duì)共相關(guān)蛋白Gal-3在小鼠肝癌細(xì)胞株中的表達(dá)及其對(duì)腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的影響
　　目的:為了深

5、入揭示肝癌淋巴道轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，研究ANXA7下調(diào)表達(dá)后，其共相關(guān)蛋白Gal-3在小鼠肝癌細(xì)胞中的表達(dá)及其對(duì)體外增殖、遷移和侵襲能力等生物學(xué)行為的影響。
　　方法:采用qRT-PCR技術(shù)，檢測(cè)ANXA7和Gal-3在Hca-P/PANXA7-control/PANXA7-down細(xì)胞中基因水平的表達(dá)情況;采用western blot技術(shù)，檢測(cè)ANXA7和Gal-3在Hca-P/PANXA7-control/PANXA7-down細(xì)

6、胞株中蛋白水平的表達(dá)情況;采用CCK-8方法，檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的增殖能力;采用Transwell小室方法，檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力;采用免疫熒光方法，檢測(cè)兩蛋白在細(xì)胞內(nèi)的定位;采用IPA及metacore(genego)等生物信息學(xué)分析軟件，分析ANXA7和Gal-3相互作用及通路上下游關(guān)系。
　　結(jié)果:在Hca-P細(xì)胞中，Annexin A7基因下調(diào)后，galectin-3在蛋白水平和基因水平均下降，細(xì)胞增殖、遷徙和侵襲能力明顯

7、降低;免疫熒光結(jié)果表明，ANXA7及Gal-3都在Hca-P細(xì)胞漿內(nèi)表達(dá)，顯示兩種蛋白相互共定位;IPA和metacore(genego)生物信息學(xué)軟件分析表明，ANXA7和Gal-3在DNA damage network and cellproliferation cycle checkpoint arrest pathway通路中發(fā)揮作用。
　　結(jié)論:ANXA7和Gal-3為共相關(guān)蛋白，兩者相互作用及表達(dá)調(diào)控可能在小鼠肝癌體外