環(huán)腺甘酸—蛋白激酶A在內(nèi)毒素休克肺損傷時(shí)誘導(dǎo)大鼠血紅素加氧酶-1上調(diào)中的作用.pdf

1、目的:嚴(yán)重的內(nèi)毒素血癥引起的器官衰竭是臨床成人及兒童病人死亡的主要原因之一。肺臟是內(nèi)毒素攻擊的主要器官，有證據(jù)表明40％的嚴(yán)重內(nèi)毒素血癥病人會(huì)引起肺損傷甚至急性呼吸窘迫綜合癥(ARDS)。內(nèi)毒素對(duì)肺通氣和循環(huán)功能引起顯著改變，包括肺部炎癥的擴(kuò)散和肺血管內(nèi)皮組織的損傷等。血紅素氧合酶(HO)是血紅素降解過(guò)程中的一種限速酶，血紅素加氧酶-1(HO-1)為其誘導(dǎo)形式，廣泛存于機(jī)體組織和細(xì)胞內(nèi)，是生物體內(nèi)較易被誘導(dǎo)的抗氧化酶類，應(yīng)激、創(chuàng)傷、低氧

2、等因素均可誘導(dǎo)其表達(dá)，發(fā)揮抗炎、抗氧化、抗細(xì)胞凋亡等細(xì)胞保護(hù)作用。盡管大量研究表明在急性肺損傷(ALI)等多種肺部疾病中，HO-1表達(dá)上調(diào)發(fā)揮著強(qiáng)大的防御作用和極具潛力的治療作用，但其內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制至今尚未完全闡明。環(huán)腺苷酸依賴的蛋白激酶A(cAMP-PKA)簡(jiǎn)稱PKA，是細(xì)胞內(nèi)一類重要的信息傳導(dǎo)途徑，并且在細(xì)胞增殖、分化、離子轉(zhuǎn)運(yùn)、新陳代謝及基因表達(dá)調(diào)控中起著重要作用。PKA是HO-1信號(hào)傳導(dǎo)通路之一，研究表明在大鼠原代肝細(xì)胞、小鼠巨

3、噬細(xì)胞RAW264.7等多種器官細(xì)胞中PKA可誘導(dǎo)HO-1的表達(dá)。本文通過(guò)建立大鼠內(nèi)毒素休克肺損傷模型，從分子水平到基因水平擬探討環(huán)腺苷酸蛋白激酶A在大鼠內(nèi)毒素休克肺損傷時(shí)血紅素加氧酶-1表達(dá)上調(diào)中的作用，在內(nèi)毒素性肺損傷的內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制方面提供新的思路和方法。
　　 方法:健康清潔級(jí)雄性SD大鼠48只，體重200～220g，2.5～3.0月齡，采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為4組(n=12):①正常對(duì)照組（C組）:左股靜脈注射生理鹽水

4、（LPS溶媒）0.5ml，2h后皮下注射生理鹽水（H89溶媒）0.5ml;②內(nèi)毒素休克肺損傷組（ALI組），左股靜脈注射LPS(10mg/kg)0.5ml，2h后皮下注射生理鹽水0.5ml;③內(nèi)毒素休克肺損傷+抑制劑組（ALI+H組）:左股靜脈注射LPS(10mg/kg)0.5ml，2h后皮下注射H89(5mg/kg)0.5ml;④抑制劑組（H組）:左股靜脈注射生理鹽水0.5ml，2h后皮下注射H89（5mg/kg）0.5ml。C組、H

5、組首次注射至6h時(shí)，ALI組與ALI+H組首次注射LPS至6h時(shí)處死大鼠取肺組織，行病理學(xué)評(píng)分，測(cè)定肺組織含水率;應(yīng)用Westernblot法測(cè)定肺組織HO-1和PKA表達(dá);采用RT-PCR法測(cè)定肺組織HO-1mRNA表達(dá)。
　　 結(jié)果:與C組比較，ALI組和ALI+H組肺組織含水率升高，肺組織損傷病理學(xué)評(píng)分升高，PKA、HO-1蛋白和HO-1mRNA表達(dá)上調(diào)(P＜0.05)，H組上述各指標(biāo)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);與A