HBV轉(zhuǎn)基因小鼠部分表型的分析及胚胎冷凍保存方法的研究.pdf

1、中同人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院V’8(J2951研究生畢業(yè)論文(碩士)HBv轉(zhuǎn)基因小鼠部分表型分析及胚胎冷凍保存方法的研究A仰lysisofphenotypeforHBVtransgenjcmiceaⅡdstudyoncryop化senrationofembryos碩士研究生導(dǎo)師申請(qǐng)學(xué)位尚書江孫巖松農(nóng)學(xué)偵士專業(yè)名稱預(yù)防獸醫(yī)學(xué)起止日期20029_20056中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心二零零五年五月中文摘要中文摘要肝細(xì)胞癌(hep

2、atocell_arcarcinoma，HcC)是世界上常見的十大惡性腫瘤之一。全世界每年約有500000～1000ooO個(gè)新增病例。Hcc發(fā)生和發(fā)展與多種致病因素有關(guān)，尤其與乙型肝炎病毒(HepatitisBvinls，HBv、感染密切相關(guān)。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)約有80％的Hcc與HBv的長(zhǎng)期感染有關(guān)，持續(xù)的HBv感染者發(fā)生HCc的危險(xiǎn)比J下常人高100～200倍。HBv具有較強(qiáng)的種屬特異性，一般不感染培養(yǎng)細(xì)胞，也不感染常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(黑

3、猩猩除外)，在一定程度上限制了對(duì)其致病機(jī)理的研究。HBV轉(zhuǎn)基因小鼠的出現(xiàn)為研究HBv致病機(jī)制及Hcc發(fā)生機(jī)制開辟了新的途徑。HBV轉(zhuǎn)基因小鼠的研究對(duì)探討HBV致HcC的機(jī)制具有重要作用。血液生化作為病理診斷的輔助性指標(biāo)，對(duì)判斷肝臟損傷有～定的參考價(jià)值。我們選擇2、6、12、18、24月齡的P2l。s6∥““s和P2IHB“”“HBv轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行血液生化指標(biāo)檢測(cè)，結(jié)果表明，2月齡轉(zhuǎn)基因小鼠血液ALll、cH0、TG、TP值明顯改變，顯示

4、轉(zhuǎn)基因小鼠肝臟在早期代謝功能發(fā)生改變，小鼠肝臟可能發(fā)生損傷。病理學(xué)研究表明，隨著月齡的增加，‘P2l“3叫”“s、P21”刪Bx兩種轉(zhuǎn)基因小鼠肝臟發(fā)生明顯病變；6月齡、12月齡時(shí)肝臟出現(xiàn)不同程度的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)、脂肪變性、不典型增生等病理損傷，18月齡、24月齡轉(zhuǎn)基因小鼠發(fā)生不同程度的肝細(xì)胞癌；24月齡轉(zhuǎn)基因小鼠發(fā)生的肝腫瘤，出現(xiàn)轉(zhuǎn)移現(xiàn)象；雄性小鼠的肝臟腫瘤發(fā)生率顯著高于雌性小鼠。采用OPs法，對(duì)兩種轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行玻璃化胚胎冷凍保存方法的

5、探索，結(jié)果野生型小鼠、P21“sAg∞咖和P2l髓劃耶。小鼠平均超排數(shù)分別為2789、1556、914枚；胚胎復(fù)率分別為887％、811％、803％；解凍后胚胎發(fā)育率分別為826％、794％、566％。結(jié)果表明HBv轉(zhuǎn)基因小鼠的超排數(shù)明顯低于野生型小鼠的超排數(shù)(PO05)，解凍后發(fā)育率P21”刪Bx小鼠明顯低于野生型小鼠和P2l”“∥”“叫、鼠(PO05)。采用胚胎移植技術(shù)，將復(fù)蘇的胚胎移植到KM假孕小鼠的子宮中，成功獲得5只轉(zhuǎn)基因小鼠