SPC-neu-polyA轉(zhuǎn)基因小鼠的建立以及表型鑒定.pdf

1、目的:目前,肺癌已經(jīng)成為威脅人類健康的第二大癌癥,本實驗通過構建整合外源基因SPC-neu-polyA的轉(zhuǎn)基因小鼠,對其表型進行鑒定,旨在通過該轉(zhuǎn)基因小鼠模型研究neu基因在發(fā)展中的作用以及肺炎與肺癌的關系。
　　 方法:本實驗分為兩大部分,第一部分為顯微注射得到整合SPC-neu-polyA的轉(zhuǎn)基因小鼠,通過:PCR、Southern blot、Western blot、FISH、免疫組化對其進行鑒定,第二部分為轉(zhuǎn)基因小鼠的表

2、型鑒定,病理切片HE染色病理鑒定,Real-Time PCR鑒定炎癥因子的表達、免疫組化鑒定炎癥因子蛋白的表達。補充實驗:免疫組化檢測10例肺癌病人組織活檢標本的neu蛋白表達和炎癥因子的表達。
　　 結(jié)果:通過PCR、Southern blot、FISH、檢測SPC-neu-polyA完整的整合到轉(zhuǎn)基因小鼠的16號染色體上。Western blot檢測到了轉(zhuǎn)基因小鼠中有neu蛋白的表達,IHC實驗顯示neu蛋白在轉(zhuǎn)基因陽性小鼠

3、的肺泡和支氣管上皮表達。
　　 病理切片HE染色發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因陽性鼠較正常小鼠有明顯的炎癥病變,并在年長小鼠中出現(xiàn)上皮細胞增生嚴重等癌前病變現(xiàn)象。免疫組化檢測到10例肺癌病人肺組織活檢標本均呈neu陽性或弱陽性,并伴有炎癥因子表達。
　　 結(jié)論:從以上實驗結(jié)果,SPC-neu-polyA轉(zhuǎn)基因小鼠已建系成功,表型鑒定為其為炎癥到癌前病變的炎癥疾病動物模型。該動物模型可用于研究neu在肺癌發(fā)展中的作用和研究肺炎與肺癌的關系。<

4、br>　　 目前,癌癥是導致人類死亡的主要因素之一。盡管在癌癥治療方面取得了巨大進展,但是,其較高的復發(fā)率還是會導致死亡。連續(xù)治療失敗的一個可能因為是,殘留的惡性細胞有類似干細胞的分化潛能,這樣就能再次形成腫瘤和造成病灶轉(zhuǎn)移。腫瘤干細胞(cancer stem cell,CSC)假說認為,腫瘤組織中存在具有自我跟新能力,無限增殖和腫瘤形成能力的一小部分腫瘤細胞,近年來,隨著在血液腫瘤和實體瘤中相繼發(fā)現(xiàn)CSC存在的相關證據(jù),對CSC的生