IRs-1基因缺失小鼠的建立及表型研究.pdf

1、目的:
　　獲得IRS-1表達(dá)缺失小鼠，研究IRS-1基因缺失小鼠表型、血糖調(diào)節(jié)能力及胰島素敏感性、進(jìn)食量、骨密度等的變化，并利用IRS-1-/-小鼠模型探討IRS-2是否對(duì)IRS-1的缺失產(chǎn)生代償及其可能的機(jī)制。
　　方法:
　　1.從Jackson Laboratory引進(jìn)自發(fā)性突變致全身IRS-1基因表達(dá)缺失的雜合子小鼠，通過雜交及基因鑒定獲得IRS-1-/-小鼠，比較IRS-1+/+、IRS-1+/-、IRS-

2、1-/-三種基因型小鼠體重、血糖、進(jìn)食量及運(yùn)動(dòng)量等的差異，microCT骨小梁三維重建分析比較1月齡及1年齡IRS-1-/-小鼠骨微結(jié)構(gòu)變化。
　　2.以骨代謝相關(guān)PCR array、脂肪形成相關(guān)PCR array檢測(cè)IRS-1-/-小鼠表達(dá)顯著差異的骨代謝及脂肪形成相關(guān)指標(biāo)，結(jié)合miRNA芯片表達(dá)譜，找出有明顯差異的miRNA及其對(duì)應(yīng)的靶基因。
　　結(jié)果:
　　1.成功獲得三種基因型小鼠，同時(shí)發(fā)現(xiàn)IRS-1-/-小鼠

3、體型瘦小，約為同窩野生型小鼠的40％-60％，生長發(fā)育遲緩，血糖正常，存在胰島素抵抗，進(jìn)食量及活動(dòng)量增加，皮下脂肪含量少，1月齡IRS-1-/-小鼠骨密度下降明顯，1年齡IRS-1-/-小鼠骨密度較野生型升高。
　　2.PCR array示IRS-1-/-小鼠部分脂肪形成相關(guān)基因顯著下調(diào)，骨代謝相關(guān)基因顯著上調(diào);miRNA表達(dá)譜分析表明:在IRS-1-/-中有34個(gè)miRNA表達(dá)上調(diào)，18個(gè)miRNA表達(dá)下調(diào)，其中miR-33表達(dá)

4、明顯下調(diào)，其靶分子為IRS-2;而胰島素信號(hào)通路的關(guān)鍵分子PI3K的表達(dá)呈現(xiàn)出組織多樣性，在肝臟、小腸等組織中表達(dá)降低，而在肌肉、脂肪、下丘腦中反而升高，IRS-2在肌肉中表達(dá)也升高。
　　結(jié)論:
　　1.我們成功獲得了自發(fā)性突變致IRS-1基因表達(dá)缺失小鼠。IRS-1缺失使胰島素敏感性降低，皮下及內(nèi)臟脂肪明顯減少，1月齡純合子小鼠骨密度下降，而1年齡純合子小鼠骨密度增加。
　　2.IRS-1信號(hào)通路缺失可由miR-3