IRs-1基因缺失小鼠的建立及表型研究.pdf

1、目的:
　　獲得IRS-1表達缺失小鼠，研究IRS-1基因缺失小鼠表型、血糖調節(jié)能力及胰島素敏感性、進食量、骨密度等的變化，并利用IRS-1-/-小鼠模型探討IRS-2是否對IRS-1的缺失產生代償及其可能的機制。
　　方法:
　　1.從Jackson Laboratory引進自發(fā)性突變致全身IRS-1基因表達缺失的雜合子小鼠，通過雜交及基因鑒定獲得IRS-1-/-小鼠，比較IRS-1+/+、IRS-1+/-、IRS-

2、1-/-三種基因型小鼠體重、血糖、進食量及運動量等的差異，microCT骨小梁三維重建分析比較1月齡及1年齡IRS-1-/-小鼠骨微結構變化。
　　2.以骨代謝相關PCR array、脂肪形成相關PCR array檢測IRS-1-/-小鼠表達顯著差異的骨代謝及脂肪形成相關指標，結合miRNA芯片表達譜，找出有明顯差異的miRNA及其對應的靶基因。
　　結果:
　　1.成功獲得三種基因型小鼠，同時發(fā)現(xiàn)IRS-1-/-小鼠

3、體型瘦小，約為同窩野生型小鼠的40％-60％，生長發(fā)育遲緩，血糖正常，存在胰島素抵抗，進食量及活動量增加，皮下脂肪含量少，1月齡IRS-1-/-小鼠骨密度下降明顯，1年齡IRS-1-/-小鼠骨密度較野生型升高。
　　2.PCR array示IRS-1-/-小鼠部分脂肪形成相關基因顯著下調，骨代謝相關基因顯著上調;miRNA表達譜分析表明:在IRS-1-/-中有34個miRNA表達上調，18個miRNA表達下調，其中miR-33表達

4、明顯下調，其靶分子為IRS-2;而胰島素信號通路的關鍵分子PI3K的表達呈現(xiàn)出組織多樣性，在肝臟、小腸等組織中表達降低，而在肌肉、脂肪、下丘腦中反而升高，IRS-2在肌肉中表達也升高。
　　結論:
　　1.我們成功獲得了自發(fā)性突變致IRS-1基因表達缺失小鼠。IRS-1缺失使胰島素敏感性降低，皮下及內臟脂肪明顯減少，1月齡純合子小鼠骨密度下降，而1年齡純合子小鼠骨密度增加。
　　2.IRS-1信號通路缺失可由miR-3