HER2靶向的嵌合性T細(xì)胞受體基因在淋巴造血細(xì)胞中的表達(dá)及其抗腫瘤效應(yīng)的研究.pdf

1、目的和意義:該研究期望:1)應(yīng)用CD3/CD28單抗激活淋巴細(xì)胞、CH296包被和離心轉(zhuǎn)染等,建立一種能將p185HER2特異的chTCR基因通過逆轉(zhuǎn)錄病毒(RV)載體高效轉(zhuǎn)染淋巴細(xì)胞的方法.2)研究轉(zhuǎn)染chTCR的淋巴細(xì)胞能否特異性殺傷表達(dá)p185HER2的腫瘤細(xì)胞.3)比較ζ和γ信號(hào)傳導(dǎo)肽在同一chTCR結(jié)構(gòu)中發(fā)揮信號(hào)傳導(dǎo)的作用.4)應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體將chTCR轉(zhuǎn)染小鼠造血干細(xì)胞,用轉(zhuǎn)基因造血干細(xì)胞移植的受體小鼠在造血重建后,其淋

2、巴細(xì)胞是否對(duì)相應(yīng)的腫瘤細(xì)胞具有排斥作用.方法和結(jié)果:將p185HER2特異性的mAb(N29)的scFv基因與ζ和γ信號(hào)傳導(dǎo)肽基因分別構(gòu)建入逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的骨架pRET6得到逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pRET6 N29γ和pRET6 N29ζ.乒乓轉(zhuǎn)染法將載體轉(zhuǎn)入包裝細(xì)胞系PG13、GP+E86成為穩(wěn)定、高效的產(chǎn)病毒細(xì)胞系,病毒滴度約為1×10<'6>CFU/ml.將HER2/neu基因構(gòu)建入逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的骨架pRET6得到逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pRET

3、6HER2,將載體轉(zhuǎn)入包裝細(xì)胞系GP+E86成為穩(wěn)定、高效的產(chǎn)病毒細(xì)胞系,收集病毒上清分別轉(zhuǎn)染小鼠腫瘤細(xì)胞系MCA-205和MT-901,轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系皮下及靜脈注射后得到表達(dá)人p185HER2的小鼠皮下腫瘤和肺轉(zhuǎn)移瘤模型.含pRET6 N29γ和pRET6 N29ζ病毒上清分別轉(zhuǎn)染小鼠骨髓造血細(xì)胞后移植給經(jīng)TBI 9.0 Gy預(yù)處理的同系小鼠,移植后6個(gè)月時(shí)分別經(jīng)皮下或靜脈接種轉(zhuǎn)染HER2的同系小鼠腫瘤細(xì)胞系MCA-205/HER2和M