高滲氯化鈉羥乙基淀粉對(duì)全身高溫大鼠的治療作用.pdf

1、全身高溫用于治療惡性腫瘤已廣泛應(yīng)用于臨床，但該療法在殺滅腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，也會(huì)對(duì)機(jī)體本身產(chǎn)生一些不利的影響。研究表明，晚期腫瘤患者體外熱灌注期間，全身高溫使患者全身血管擴(kuò)張，循環(huán)阻力下降，心輸出量增加，心血管系統(tǒng)呈現(xiàn)“高排低阻”的特征，同時(shí)大量排汗和呼吸道蒸發(fā)也會(huì)引起大量的液體丟失。為維持血流動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定常輸入大量的液體，而輸入的液體量很難剛好符合機(jī)體的需求，往往是輸入過(guò)多的液體，臨床上在以輸注林格氏液和單純?nèi)斯つz體為主的前提下很容易導(dǎo)致肺

2、水腫和腦水腫的發(fā)生?，F(xiàn)有的研究指出脈絡(luò)叢血腦脊液屏障和毛細(xì)血管血腦屏障一起維持神經(jīng)細(xì)胞的液體平衡，任一屏障運(yùn)輸功能障礙都將導(dǎo)致水、離子和蛋白進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，這些屏障的破壞將導(dǎo)致腦水腫和其它適應(yīng)性機(jī)能的喪失。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞和室管膜細(xì)胞對(duì)全身高溫十分敏感，將大鼠置于38℃的環(huán)境中加熱4小時(shí)，血漿中伊文思蘭和碘131轉(zhuǎn)運(yùn)至腦脊液的量明顯增加，背側(cè)海馬和尾狀核明顯藍(lán)染，并出現(xiàn)脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞的破壞和室管膜細(xì)胞的損害，腦室的擴(kuò)大和神經(jīng)

3、纖維網(wǎng)的破壞，血腦脊液屏障的破壞伴隨著在海馬，尾狀核，丘腦和下丘腦部位明顯的腦水腫形成。臨床上實(shí)施全身高溫的腫瘤患者，部分在麻醉結(jié)束后會(huì)出現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的異常表現(xiàn)，可能與熱應(yīng)激和逾量輸液引起的腦水腫有關(guān)。 材料和方法: 1．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物： 成年雄性SD大鼠75只，體質(zhì)量（220～250）g，由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。 2．全身高溫模型的制作： 實(shí)驗(yàn)大鼠用3％的戊巴比妥鈉按45mg/kg腹腔注射，

4、麻醉成功后行股靜脈穿刺置管用于液體輸注，行股動(dòng)脈穿刺置管連接動(dòng)脈換能器監(jiān)測(cè)平均動(dòng)脈壓（MAP），然后將大鼠放入36℃具備生物氧供給的加溫艙中加熱3h以使肛溫達(dá)到（41～42）℃，加熱結(jié)束后將大鼠置于室溫下降溫1h，然后給予相應(yīng)的處理。加熱開始時(shí)按實(shí)驗(yàn)分組用微量泵輸入相應(yīng)的液體，所有液體在30min內(nèi)恒速輸完。 3．實(shí)驗(yàn)分組及處理因素： 實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分成5組，每組15只，分組及處理因素分別為： ①正常對(duì)照組（C組）

5、25℃-26℃的可控環(huán)境; ②高溫組（HT組）加熱不輸液; ③高溫林格組（RL組）36 ml/kg RL; 4．觀測(cè)指標(biāo)與標(biāo)本的采集： 分別于加熱前（T0）、加熱15min（T1）、加熱30 min（T2），加熱45 min（T3），加熱60min（T4），加熱75min（T5），加熱90min（T6），加熱105min（T7），加熱120min（T8），加熱135min（T19），加熱150min（T1

6、0），加熱165min（T11），加熱180min（T12）共13個(gè)時(shí)點(diǎn)采集平均動(dòng)脈壓和肛溫的數(shù)據(jù)，并分別于加熱前（基礎(chǔ)值），輸液結(jié)束時(shí)，加熱結(jié)束時(shí)抽取動(dòng)脈血檢測(cè)血?dú)狻?shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)取腦組織進(jìn)行腦組織百分含水量，伊文思蘭滲出量的測(cè)定和海馬錐體細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察。 5．腦組織百分含水量的測(cè)定： 每組取六只大鼠，于實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)斷頭取腦，將取得的腦組織放在內(nèi)有0．5ml生理鹽水濕潤(rùn)的定性濾紙培養(yǎng)皿中，以防水分蒸發(fā)，剝離干凈軟腦膜和血凝塊

7、，濾紙吸干表面液體，取右腦組織（0．2～0．3）g，放入105℃電熱恒溫干燥箱內(nèi)烘烤72h至恒重后稱干重（兩次干重之差≤0．0002g），根據(jù)Elliot公式計(jì)算腦組織百分含水量，腦含水量（％）=（濕重-干重）/濕重×100％。 6．腦組織伊文思蘭含量的測(cè)定： 每組取六只大鼠，待肛溫降至37℃時(shí)，從股靜脈注入2％的伊文思蘭3ml/kg，1h后開胸暴露心臟，將穿刺針自心尖部插入心臟并送達(dá)主動(dòng)脈開口處固定，剪開右心耳，用37

8、℃肝素生理鹽水（100u/ml）灌洗至右心耳流出清亮的液體，斷頭取腦，將取得的腦組織放在內(nèi)有0．5ml生理鹽水濕潤(rùn)的定性濾紙培養(yǎng)皿中，以防水分蒸發(fā)，剝離干凈軟腦膜，濾紙吸干表面液體，取右腦組織（0．2～0．3）g，稱濕重后置于盛有3ml甲酰胺的試管中，加上橡皮塞，置37℃恒溫水浴箱中，48h后1500g離心10min，吸取上清液，用Molecular Devices M5連續(xù)光譜多功能微孔閱讀器于波長(zhǎng)632nm處測(cè)吸光度（OD值）。根據(jù)

9、標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算EB含量（μg/g，腦濕重）。 7．海馬錐體細(xì)胞細(xì)胞形態(tài)學(xué)的觀察： 每組取3只大鼠待肛溫降至37℃時(shí)開始計(jì)時(shí)，1h后開胸暴露心臟，將穿刺針自心尖部插入心臟并送達(dá)主動(dòng)脈開口處固定，剪開右心耳，經(jīng)升主動(dòng)脈快速灌注37℃肝素鹽水（100u/ml）共150ml，繼之快速灌注冰冷的4％多聚甲醛200ml，再用其300ml在2小時(shí)內(nèi)慢速灌注。斷頭取腦，取右半腦組織浸入4％多聚甲醛內(nèi)，待溫度升至4μ后固定48小時(shí)，修成厚

10、4mm塊，常規(guī)灑精脫水，石蠟包埋，行5μm冠狀切片，作HE染色，Nikon顯微鏡下觀察，照像。 8．統(tǒng)計(jì)學(xué)分析： 所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用SPSS13．0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。每組動(dòng)物平均體質(zhì)量，基礎(chǔ)肛溫，基礎(chǔ)血壓，腦組織百分含水量和伊文思蘭滲出量指標(biāo)的組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用LSD法，各采集點(diǎn)的平均動(dòng)脈壓，肛溫，動(dòng)脈血?dú)夥治霾捎弥貜?fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的方差分析，不同時(shí)間點(diǎn)的組間多重比較和組內(nèi)不

11、同時(shí)間點(diǎn)的多重比較均采用LSD法，P<0．05認(rèn)為差異有顯著性意義。 結(jié)果: 1．基本資料： 各組動(dòng)物平均體質(zhì)量，基礎(chǔ)肛溫和基礎(chǔ)血壓差異無(wú)顯著性（P>0．05）。 2．平均動(dòng)脈壓的變化： 經(jīng)重復(fù)資料的方差分析，顯示組間大鼠的MAP在加熱過(guò)程中有顯著性差異（F=31．923 P=0．000），時(shí)間點(diǎn)間有差異（F=55．191 P=0．000），二者有交互作用（F=9．413 P=0．000），進(jìn)一步

12、進(jìn)行單獨(dú)效應(yīng)分析，對(duì)各時(shí)點(diǎn)內(nèi)的不同組間和各組內(nèi)的不同時(shí)點(diǎn)的MAP進(jìn)行LSD多重比較，結(jié)果顯示在T11和T12兩個(gè)時(shí)點(diǎn)，HT組大鼠的MAP與其他各實(shí)驗(yàn)組相比均有顯著性差異（P<0．05），HSH組大鼠的MAP與C組的組間比較差異均無(wú)顯著性，而RL組的MAP較C組降低。 3．肛溫的變化： 經(jīng)重復(fù)資料的方差分析，顯示組間大鼠的肛溫在加熱過(guò)程中有顯著性差異（F=729．519 P=0．000），時(shí)間點(diǎn)間有差異（F=3208．79

13、0 P=0．000），二者有交互作用（F=210．281 P=0．000），進(jìn)一步進(jìn)行單獨(dú)效應(yīng)分析，對(duì)各時(shí)點(diǎn)內(nèi)的不同組間和各組內(nèi)的不同時(shí)點(diǎn)進(jìn)行LSD多重比較，結(jié)果顯示在不同時(shí)點(diǎn)和不同組間，各實(shí)驗(yàn)組大鼠的肛溫升高，HSH組大鼠的肛溫與其它各組相比均有顯著性差異（P<0．05）。 4．腦組織百分含水量的變化： 各組大鼠的腦組織百分含水量有顯著性差異（F=81．886，P=0．000），C、HT、RL、HRL、HSH組大鼠的腦

14、組織含水量分別為（％）：78．11±0．58、82．83±0．54、81．86±0．57、80．22±0．60、79．15±0．26；對(duì)組間進(jìn)行LSD多重比較顯示：HSH組大鼠的腦組織百分含水量較C組升高，HSH組與HT組大鼠的腦組織百分含水量差異有顯著性（P<0．05）。 5．腦組織伊文思蘭滲出量的變化： 各組大鼠的朗滲出量有顯著性差異（F=286．629 P=0．000），C、HT、RL、HRL、HSH組的EB值分別

15、為（ug/g）：2．26±0．09、9．79±0．48、8．41±0．33、6．98±0．61、5．87±0．38，通過(guò)組問(wèn)多重比較顯示，HSH組大鼠的EB滲出量較C組升高，HSH組與HT組大鼠的EB滲出量差異有顯著性（P<0．05）。 6．動(dòng)脈血?dú)獾淖兓?經(jīng)重復(fù)資料的方差分析顯示，在加溫過(guò)程中，HT組大鼠的PH、PaO2、PaCO2、HCT、Na+、K+與C組相比有顯著性差異（P<0．05），組間及各時(shí)點(diǎn)內(nèi)的多重比較

16、顯示：在輸液結(jié)束后，HSh組的Na+和K+升高，與C組相比有顯著性差異（P<0．01），而PaO2、PaCO2、PH與C組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。PH、PaO2、PaCO2、HCT、Na+、K+在RL和HRL組差異無(wú)顯著性。 7．海馬錐體細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化： 正常腦組織海馬CA3區(qū)的錐體細(xì)胞排列整齊，形態(tài)完整，胞核飽滿，核仁清晰，尼氏體豐富。HT組中細(xì)胞數(shù)目減少，殘留的神經(jīng)元細(xì)胞核大溶解、消失，胞體增大，邊緣不清，尼氏體消失

17、，大部分成為鬼影細(xì)胞。RL組中細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，呈多角型或梭型，胞膜皺縮，胞核固縮、濃染，核膜凹陷，核仁模糊不清或消失，細(xì)胞質(zhì)空泡樣變。HRL組中空泡樣變細(xì)胞明顯減少，可見大量核濃然的細(xì)胞。HSH組中大量正常的錐體細(xì)胞間散落少量的細(xì)胞核濃染的神經(jīng)元，偶見胞核固縮、核膜凹陷、核質(zhì)濃染、核仁模糊不清、胞體及胞核形態(tài)不規(guī)則的神經(jīng)元。 結(jié)論: 1．全身高溫導(dǎo)致大鼠血腦屏障通透性升高，腦水腫形成，海馬錐體細(xì)胞變性與壞死。 2