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1、目的: 本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)建立大鼠全肝缺血再灌注損傷模型,測(cè)定肝臟缺血再灌注后血清中內(nèi)毒素水平、細(xì)胞因子TNF-a、IL-6、IL-10水平、肝組織MPO水平及觀察肝臟組織病理改變,從而探討肝臟缺血再灌注損傷發(fā)生機(jī)制及牛腸堿性磷酸酶的保護(hù)作用機(jī)制。 方法: 將SD大鼠72只隨機(jī)分為3組:(1)假手術(shù)組(S組):n=24,大鼠只接受麻醉,開(kāi)腹,游離肝周韌帶,不阻斷肝臟供血,分別于手術(shù)后1、3、6、12h收集血液及肝組織
2、標(biāo)本,每個(gè)時(shí)間點(diǎn)n=6;(2)生理鹽水對(duì)照組(N組):依Pringle's法建立肝臟缺血再灌注模型,阻斷入肝血流20min,在再灌注前5min從尾靜脈注射生理鹽水1ml,收集標(biāo)本時(shí)間點(diǎn)及各時(shí)間點(diǎn)動(dòng)物數(shù)同S組;(3)牛腸堿性磷酸酶實(shí)驗(yàn)組(C組):阻斷入肝血流20min,在再灌注前5min從尾靜脈注射牛腸堿性磷酸酶0.5u/g,其余同N組。于再灌注后1、3、6、12h各時(shí)間點(diǎn)再次入腹,經(jīng)門(mén)靜脈取血4ml,離心(4℃,3000r/min)10
3、min后,取上清置于-80℃冰箱保存待測(cè)。接觸血液標(biāo)本的器皿均為一次性無(wú)熱源器皿。取肝左葉用10%福爾馬林固定,石蠟包埋待用,肝右葉快速置于液氮中保存待測(cè)。采用鱟試劑終點(diǎn)顯色法檢測(cè)血清內(nèi)毒素水平;酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)法檢測(cè)血清TNF-a、IL-6、IL-10水平;髓過(guò)氧化物酶法檢測(cè)肝組織中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)程度;HE染色法觀察肝組織病理改變。 結(jié)果: (1)血清內(nèi)毒素的水平變化:再灌注后S組血清內(nèi)毒素水平在各時(shí)間點(diǎn)無(wú)顯著變化(P>
4、0.05),N組及C組內(nèi)毒素水平在再灌注后較S組明顯升高,3h達(dá)高峰,在同一時(shí)間點(diǎn)C組血清內(nèi)毒素水平顯著低于N組(P<0.05)。(2)血清細(xì)胞因子的水平變化:再灌注后S組血清TNF-a、IL-6、IL-10水平變化在各時(shí)間點(diǎn)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),N組及C組TNF-a、IL-6水平均較S組顯著升高(P<0.05),TNF-a水平高峰出現(xiàn)在再灌注后3h,IL-6水平高峰出現(xiàn)在再灌注后6h,到再灌注12h,TNF-a、IL-6水平仍
5、高于S組,在同一時(shí)間點(diǎn)C組TNF-a、IL-6水平顯著低于N組(P<0.05),N組IL-10水平在再灌注1h稍有升高,到再灌注6h達(dá)高峰后迅速下降,再灌注12h,N組IL-10水平與S組沒(méi)有顯著性差異(P>0.05),C組各時(shí)間點(diǎn)IL-10水平升高較N組明顯,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(3)肝組織MPO的水平變化:再灌注后S組肝組織MPO值各時(shí)間點(diǎn)無(wú)顯著變化(P>0.05),N組和C組肝組織MPO值再灌注后明顯升高,6h達(dá)到最
6、高,顯著高于S組(P<0.05),在同一時(shí)間點(diǎn)C組MPO值顯著低于N組(P<0.05)。(4)肝組織病理學(xué)改變:S組肝小葉結(jié)構(gòu)完整,肝細(xì)胞排列整齊,未見(jiàn)明顯壞死和中性粒細(xì)胞浸潤(rùn);N組肝細(xì)胞排列紊亂,肝小葉結(jié)構(gòu)不完整,部分肝細(xì)胞索、肝竇分界不清,肝竇內(nèi)見(jiàn)較多紅細(xì)胞淤積,肝細(xì)胞明顯水腫、脂肪變性,胞漿疏松化,呈氣球樣變性,可見(jiàn)核固縮及凋亡小體,炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)較多;C組肝細(xì)胞損傷較N組減輕,肝組織結(jié)構(gòu)破壞較輕,肝小葉結(jié)構(gòu)清晰,肝竇間隙見(jiàn)少量紅細(xì)
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