PPARγ在大鼠非酒精性脂肪性肝病中的表達(dá)及甘正復(fù)方的作用.pdf

1、本文研究目的：非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholicfattyliverdisease，NAFLD)的患病率逐年升高，其發(fā)病機(jī)制未完全明確，目前尚缺乏公認(rèn)的效果理想的治療藥物。通過(guò)高脂飲食制作大鼠非酒精性脂肪性肝病模型，觀察大鼠血脂、脂質(zhì)過(guò)氧化系統(tǒng)、肝功能、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisomeproliferator-activatedreceptorgamma，PPARγ)蛋白和mRNA表達(dá)及肝組織病理學(xué)等變化，了

2、解甘正復(fù)方治療非酒精性脂肪性肝病的療效及作用途徑。 研究方法：將30只雄性SD大鼠正常喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為3組：正常組、模型組、甘正復(fù)方組，每組10只。正常組普通飼料喂養(yǎng)；模型組和治療組喂高脂飼料，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自由飲水、進(jìn)食。造模開始后第13周正常組和模型組以蒸餾水10ml/kg鼠重灌胃，每日一次；甘正復(fù)方組予甘正復(fù)方溶液10ml/kg鼠重灌胃，每日一次。 實(shí)驗(yàn)第16周末處死大鼠，取血清和肝組織標(biāo)本。用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血

3、清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)活性和總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平。采用放免法測(cè)定血清腫瘤壞死因子α(TNFα)水平。按照試劑盒說(shuō)明測(cè)定肝勻漿中TC、TG和丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力。肝組織標(biāo)本石蠟切片，行蘇木素-伊紅染色，光鏡下評(píng)估肝組織脂肪變性程度及炎癥活動(dòng)度計(jì)分。分別以免疫組織化學(xué)染色、蛋白質(zhì)免疫印跡法和反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)肝組織PPARγ蛋白和mRNA的表達(dá)。

4、 兩組間實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的比較采用成組設(shè)計(jì)的兩樣本均數(shù)t檢驗(yàn)；等級(jí)資料采用秩和檢驗(yàn)；兩變量間相關(guān)性分析采用直線相關(guān)分析法。 研究結(jié)果： 1.體重及肝/體重指數(shù)：與正常組相比，模型組大鼠體重明顯增加，肝/體重指數(shù)顯著升高(t=-10.326,-8.763，P均＜0.01)；與模型組相比，甘正復(fù)方組大鼠體重及肝/體重指數(shù)明顯降低(t=9.047，9.065，P均＜0.01)。 2.病理學(xué)觀察：模型組肝細(xì)胞普遍發(fā)生脂肪變性，細(xì)

5、胞腫脹，胞漿疏松，內(nèi)含較大的脂肪滴，其肝組織脂肪變性程度與正常組相比有顯著差異(P＜0.01)；甘正復(fù)方組肝細(xì)胞脂滴數(shù)量明顯減少，肝細(xì)胞體積變小，其肝組織脂肪變性程度明顯輕于模型組(P＜0.01)。正常組肝組織基本無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；模型組肝小葉內(nèi)出現(xiàn)匯管區(qū)炎癥，炎癥活動(dòng)度計(jì)分明顯高于正常組(P＜0.01)；甘正復(fù)方組炎癥活動(dòng)明顯輕于模型組(P＜0.01)。 3.與正常組相比，模型組血清TC、ALT、AST、TNFα水平(t=-7.

6、385、-13.535、-10.730、-23.751，P均＜0.01)和肝勻漿TG、MDA含量明顯增高(t=-8.035、-11.806，P均＜0.01)，肝勻漿SOD活力顯著降低(t=11.888，P＜0.01)；與模型組相比，甘正復(fù)方組血清TC、ALT、AST、TNFα水平(t=5.635、3.355、6.257、15.080，P均＜0.01)和肝勻漿TG、MDA含量明顯降低(t=7.433、9.380，P均＜0.01)，肝勻漿S

7、OD活力顯著升高(t=-7.416，P＜0.01)。 4.免疫組織化學(xué)染色：正常組見棕黃色顆粒主要分布在匯管區(qū)周圍肝細(xì)胞胞核內(nèi)，中央靜脈周圍肝細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)少；模型組PPARγ陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞明顯少于正常組(P＜0.01)；甘正復(fù)方組則明顯高于模型組(P＜0.05)。 5.蛋白質(zhì)免疫印跡法(Westernblot)及反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)：與正常組相比，模型組肝組織PPARγ蛋白和mRNA的表達(dá)明顯減弱(t=200

8、.386、10.470，P均＜0.01)；甘正復(fù)方組肝組織PPARγ蛋白和mRNA的表達(dá)顯著高于模型組(t=-48.114、-3.686，P均＜0.01)。 6.相關(guān)分析：模型組肝組織PPARγmRNA表達(dá)與血清TNFα水平和肝組織TG、MDA含量及肝組織炎癥程度呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.917、-0.727、-0.763、-0.833，P值分別＜0.01、0.05、0.05、0.01)，與肝組織SOD活力呈顯著正相關(guān)(r=0.8