大豆bHLH04G和bHLH06G轉(zhuǎn)錄因子的原核表達(dá)研究及對皂苷合成和結(jié)瘤固氮的影響.pdf

1、轉(zhuǎn)錄因子可以和啟動子互作影響基因表達(dá)，對基因有重要的調(diào)控作用，bHLH家族轉(zhuǎn)錄因子是第二大轉(zhuǎn)錄因子。本實驗圍繞大豆中bHLH04G、bHLH06G兩個轉(zhuǎn)錄因子對于皂苷合成和固氮結(jié)瘤的影響展開研究。β-香樹脂醇合成酶是大豆皂苷合成的第一個關(guān)鍵酶，本團(tuán)隊竇富強(qiáng)同學(xué)用酵母單雜交篩選到與其互作的兩個轉(zhuǎn)錄因子bHLH04G和bHLH06G。大豆是重要的油料作物，其代謝調(diào)控的研究對于改良大豆品質(zhì)性狀有著重要的意義。
　　本實驗對這兩個基因分別

2、構(gòu)建原核表達(dá)載體進(jìn)行原核表達(dá)，發(fā)現(xiàn)這兩個蛋白均主要形成包涵體，嘗試不同的誘導(dǎo)條件并更換載體后，蛋白仍主要形成包涵體。此外，構(gòu)建RNAi載體培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因大豆發(fā)根來研究這兩個轉(zhuǎn)錄因子對于皂苷合成和固氮結(jié)瘤的影響。通過對轉(zhuǎn)基因發(fā)根結(jié)瘤數(shù)統(tǒng)計和檢測結(jié)瘤相關(guān)基因表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)將這兩個基因分別沉默掉以后，結(jié)瘤數(shù)均顯著減少，結(jié)瘤相關(guān)基因表達(dá)量均降低。同時檢測轉(zhuǎn)基因發(fā)根皂苷合成關(guān)鍵基因AMS表達(dá)情況并提取皂苷檢測皂苷含量和成分的變化，發(fā)現(xiàn)將這兩個基因沉默