不同濃度HGF及EGF體外誘導兔BMSCs向肝細胞分化的研究.pdf

1、目的：通過不同濃度肝細胞生長因子（hepatocyte growth factor，HGF）和表皮細胞生長因子（epidermal cell growth factor，EGF）體外誘導兔骨髓間充質(zhì)干細胞（bone mesenchymal stem cells，BMSCs）向肝細胞分化，以探討HGF和EGF的最適濃度組合。 方法：密度梯度離心法分離兔BMSCs，體外培養(yǎng)，傳代純化。建立以HGF（30.0ug/L）+EGF（1.5

2、mg/L）、HGF（40.0ug/L）+EGF（2.5mg/L）、HGF（50.0ug/L）+EGF（3.5mg/L）、HGF（60.0ug/L）+EGF（4.5mg/L）為誘導的培養(yǎng)體系。觀察誘導細胞形態(tài)學變化，于7、14、21、28d采用免疫細胞化學及免疫熒光分別檢測肝細胞表面標志甲胎蛋白（alpha fetoprotein AFP）及白蛋白（albumin ALB），留取不同時段培養(yǎng)上清液，用溴甲酚綠法（bromcresol gr

3、een BCG）檢測上清液中ALB含量，用尿素合成試驗檢測尿素含量。 結(jié)果：14d開始可觀察到多極性的肝細胞樣細胞，呈短梭形和多角形，隨誘導時間延長（21d）形成多細胞集落，各組形態(tài)學比較無明顯差異。免疫細胞化學檢測，7d時AFP表達陽性，14d達最大值后即開始下降（P<0.05），各濃度組間表達無差別（P>0.05）。免疫熒光檢測，14d開始ALB表達陽性，1組、4組各時間點比較無差別（P>0.05），2組及3組隨誘導時間延長

4、，陽性表達細胞數(shù)增加（P<0.05）?？v向比較：總體上各組之間有顯著性差異，且濃度越高，陽性細胞數(shù)越高（P<0.05）。兩兩比較，在14d時1組與2組無差別，在21d時2組與3組表達無差別，28d時3組與4組表達無差別（p>0.05）。溴甲酚綠法檢測，12d細胞培養(yǎng)上清液中可檢測到ALB，ALB含量在早期（9-15d）表現(xiàn)為濃度越高含量越高（（P<0.05），18或21d達高峰后下降，此時各濃度組間含量無差別（p>0.05），最高峰值在